核殼型抗EV71免疫球蛋白(IgY)微膠囊的制備及性能研究.pdf

1、腸道病毒71型(Enterovirus type71，EV71)是小型RNA病毒科腸道病毒屬成員，其感染性強(qiáng)、致病率高，是導(dǎo)致手足口病的主要病原，同時(shí)能引起多種與神經(jīng)系統(tǒng)相關(guān)的疾病。目前針對(duì)腸道病毒71型感染多采用抗生素進(jìn)行治療，導(dǎo)致病毒耐藥性不斷增加?？诜禺愋月腰S免疫球蛋白(Eggyolk immunoglobulin，IgY)可治療由細(xì)菌或病毒引起的腸道疾病，具有安全無殘留、不產(chǎn)生抗藥性、服用簡(jiǎn)便等優(yōu)點(diǎn)，是一種具有廣闊應(yīng)用前景的抗

2、生素替代品。但I(xiàn)gY在高強(qiáng)度的胃酸環(huán)境中易被胃蛋白酶降解，失去抗體活性。因此，如何避免IgY在胃中失活，而在小腸中穩(wěn)定地發(fā)揮作用，是一個(gè)亟待解決的問題。針對(duì)這一問題，本論文采用層層自組裝微囊化技術(shù)包埋IgY。以IgY為晶體生長(zhǎng)調(diào)控劑制備含IgY的碳酸鈣微球，并以此作為模板核，在其表面層層組裝聚賴氨酸(PLL)和聚谷氨酸(PGA)。用乙二胺四乙酸二鈉(EDTA)溶去碳酸鈣后，得到內(nèi)部填充IgY的微膠囊。
　　本論文以IgY為晶體生長(zhǎng)

3、調(diào)控劑合成CaCO3(IgY)粒子，考察了IgY濃度對(duì)微粒的形貌和包裹率的影響，同時(shí)考察了沉積反應(yīng)時(shí)間對(duì)CaCO3粒子形貌的影響，實(shí)驗(yàn)表明在IgY濃度為1.0 mg/mL、沉積反應(yīng)時(shí)間為30 min的實(shí)驗(yàn)條件下可得到表面光滑粒徑均一的碳酸鈣微球。然后，采用掃描電子顯微鏡、熒光顯微鏡、粒度分析儀、熱重分析儀對(duì)合成的碳酸鈣微球的摻雜形式及形貌、粒徑分布、IgY含量進(jìn)行了表征。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，合成的碳酸鈣微球?yàn)楸砻婀饣瑹o突起，粒徑分布均勻，主要

4、在5～8μm之間，單分散性好，可作為層層自組裝微膠囊制備過程中的模板核心。
　　為制備核殼結(jié)構(gòu)微球，以碳酸鈣微球?yàn)楹诵?，以聚陽離子電解質(zhì)PLL和聚陰離子電解質(zhì)PGA為壁材，利用層層自組裝法得到了核殼結(jié)構(gòu)微球。采用掃描電子顯微鏡、熒光顯微鏡和zeta電位分析儀對(duì)核殼結(jié)構(gòu)粒子形貌進(jìn)行表征，證實(shí)了該粒子的核殼結(jié)構(gòu)。通過EDTA-Na將碳酸鈣模板去除后，得到內(nèi)含IgY的聚多肽微膠囊。進(jìn)一步探討了微膠囊對(duì)IgY的釋放行為的影響。其結(jié)果表明中

5、空微膠囊對(duì)IgY的釋放有一定的延緩作用，隨著微膠囊包裹的層數(shù)增加，延緩釋放效果更佳。在體外實(shí)驗(yàn)中，IgY和IgY微膠囊都能抑制病毒，表明IgY經(jīng)微膠囊包裹后，生物免疫活性沒受影響。在體內(nèi)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中，口服IgY微膠囊治療后病情很快得到控制。通過組織切片和組織病毒檢測(cè)結(jié)果可知，IgY微膠囊對(duì)小鼠的治療效果明顯好與IgY治療效果。由此可見，IgY經(jīng)聚多肽微囊包埋后，經(jīng)胃酸和胃蛋白酶環(huán)境其抗體活性受到保護(hù)，并且可于小腸中定點(diǎn)釋放，能有效治愈EV