納米細菌在間質(zhì)性膀胱炎發(fā)病機制中作用的初步研究.pdf

1、目的：
　　 間質(zhì)性膀胱炎（interstitiAlcystitis，IC)是一組以盆底部和／或會陰部間歇性疼痛伴有尿頻、尿急和儲尿期疼痛為臨床表現(xiàn)的癥候群，病理學(xué)主要表現(xiàn)為不明原因的膀胱壁的慢性炎癥和膀胱的慢性間質(zhì)纖維化。最近幾年來我國該病的確診率逐年上升，流行病學(xué)調(diào)查發(fā)現(xiàn)90％發(fā)生于中年婦女，嚴重影響患者生活質(zhì)量。目前IC 病因與發(fā)病機理不清，臨床診治中患者需經(jīng)歷多次膀胱鏡檢查及膀胱組織活檢，患者極其痛苦，診治費用高，且易出

2、現(xiàn)誤診誤治，即使明確診斷，臨床上仍無有效的治療方案，該病已成為困擾國內(nèi)外泌尿外科醫(yī)師的一大難題。IC患者膀胱活檢組織及尿液標本常規(guī)細菌培養(yǎng)無微生物發(fā)現(xiàn)，臨床常規(guī)抗炎治療無效，但部分IC患者經(jīng)四環(huán)素類抗生素治療后臨床不適癥狀明顯減輕，啟示我們可能有潛在的病原微生物存在。因此，對IC 進行新的病原菌的探索研究有可能對該病的臨床診治產(chǎn)生重大意義。
　　 近年來納米細菌（nanobacteria，NB）的發(fā)現(xiàn)及其生物學(xué)特性的揭示為IC的

3、發(fā)生機制研究提供了新的切入點。研究證實，NB是一種能引起組織慢性炎癥的革蘭陰性菌，普通微生物培養(yǎng)液不適用于NB 生長，必須用細胞培養(yǎng)基對其進行培養(yǎng)，NB在人體內(nèi)主要經(jīng)泌尿道排泄，除四環(huán)素類藥物外對其它抗生素不敏感。目前國內(nèi)外關(guān)于NB與IC 發(fā)病關(guān)系的相關(guān)研究尚無報道。本項目在前期實驗中已從IC患者膀胱組織中成功分離、培養(yǎng)、獲得了具有誘發(fā)組織慢性炎癥能力的NB。我們推測，NB 感染膀胱組織誘發(fā)的慢性炎癥特點可解釋IC的臨床病理發(fā)病過程，N

4、B 極有可能參與了IC的發(fā)生與發(fā)展。本研究擬探討NB在IC 發(fā)病中的病因作用，研究結(jié)果可望為IC的臨床診治提供新的病原學(xué)依據(jù)，為深入研究NB與IC 發(fā)病的關(guān)系打下理論基礎(chǔ)和實驗依據(jù)。
　　 方法：
　　 1) 依據(jù)間質(zhì)性膀胱炎診斷及評分標準，確立納入該項研究患者。膀胱鏡下收集間質(zhì)性膀胱炎患者的膀胱組織，采用熒光免疫組化染色和電鏡觀察檢測膀胱組織中是否存在納米細菌的可能。
　　 2) 將收集的間質(zhì)性膀胱炎患者的膀胱

5、組織及尿液標本進行預(yù)處理后進行納米細菌的分離培養(yǎng)，并采用免疫熒光染色、電鏡觀察及16SrRNA基因擴增及測序法對培養(yǎng)微生物進行觀察鑒定。
　　 3) NB 檢測陽性患者抗NB 治療：四環(huán)素（500mg）+生理鹽水（30ml）膀胱灌注，1次/周，共6次；四環(huán)素500mg，口服，1次/日，連續(xù)3個月。采用OSPI和PUF 進行治療前后評分。
　　 4) NB 感染大鼠膀胱組織的觀測：實驗設(shè)立正常對照組(單純手術(shù)組)、生理鹽水

6、組，NB組和NB+抗NB 治療組。采用大鼠膀胱內(nèi)注射NB 法制作動物模型。觀察大鼠排尿情況及行為學(xué)變化，檢測相關(guān)炎癥指標、肥大細胞活化情況及相關(guān)疼痛指標，進行膀胱組織中的NB的分布檢測和體外NB的再分離培養(yǎng)及鑒定。
　　 主要結(jié)果和結(jié)論如下：
　　 1.27例IC患者成功入選該項實驗研究，熒光免疫染色和電鏡下成功檢測到IC膀胱組中存在NB，其主要分布膀胱間質(zhì)組織中，呈簇狀分布。結(jié)果表明在部分IC患者的膀胱在組織中的確有N

7、B 存在。
　　 2．27例IC患者的膀胱組織進行分離培養(yǎng)，結(jié)果表明48.1％患者膀胱組織中分離培養(yǎng)并鑒定出NB；而正常人中只有1例檢測出NB的類似物。該研究結(jié)果高度提示NB與IC的發(fā)病關(guān)系密切，值得進一步研究探討二者之間的關(guān)系。
　　 3．針對NB 陽性患者予以抗NB 治療，能減輕IC患者臨床癥狀。
　　 4．NB 感染能引起大鼠膀胱組織慢性炎癥。四環(huán)素抗感染治療，能減輕膀胱組織的炎癥。
　　 5．NB