三嗪類除草劑撲草凈快速免疫檢測方法的研究.pdf

1、本論文對三嗪類除草劑撲草凈的快速免疫檢測方法進行了深入、系統(tǒng)的研究。建立了簡便、快速、實用的撲草凈免疫檢測方法——直接競爭酶聯(lián)免疫檢測方法(dc-ELISA)和膠體金免疫層析試紙條檢測方法(CGIA)。
　　通過合成撲草凈半抗原，利用活化酯法連接載體蛋白(BSA)作為免疫原，制備出高效價、高特異性的多克隆抗體。對ELISA方法的工作條件（抗體包被量，酶標抗原稀釋度，封閉液種類和濃度等）進行優(yōu)化，對影響實驗的各因素（離子強度，pH值

2、等）進行了研究，最終確定方法的最佳工作條件為:抗體包被量為0.25μg/孔，酶標抗原的稀釋度為1∶50000，封閉液為0.5％乳粉，樣品稀釋液為1×PBS，pH=7.4。在此條件下建立ELISA方法的靈敏度(IC50)為0.3±0.03ng/mL，最低檢出限(IC15)為0.04±0.006ng/mL?？贵w對撲滅津和撲滅通的交叉反應(yīng)率分別為71.4％和50％，對其他幾種結(jié)構(gòu)類似的三嗪類除草劑的交叉反應(yīng)率較低。在對實際樣品進行檢測的研究中

3、，選擇海河水、土壤、和大米作為研究對象考查了它們的基質(zhì)影響及其去除方法，并進行添加回收實驗。直接競爭酶聯(lián)免疫檢測方法的回收率在80-120％。海河水、土壤、大米中撲草凈的檢出限分別為0.4ng/mL、0.8μg/kg和0.8μg/kg。
　　采用檸檬酸三鈉還原法制備出粒徑為17.4nm的膠體金粒子，對CGIA方法的工作條件（包被抗原、羊抗兔二抗和金標抗體的稀釋倍數(shù)、NC膜的封閉條件、金標墊處理液的種類等）進行優(yōu)化。最終確定方法最佳

4、工作條件為:包被原稀釋倍數(shù)為1∶15，羊抗兔二抗稀釋倍數(shù)為1∶300，金標抗體的稀釋倍數(shù)為1∶10，NC膜不做封閉，金標墊用10％蔗糖、5％BSA、0.1％吐溫、0.1％疊氮鈉處理。建立的方法檢出限為5ng/mL，5min內(nèi)可以通過目測進行結(jié)果判斷。海河水不需要任何處理可以直接進行檢測，檢出限為5ng/mL。
　　通過高效液相色譜法對本研究建立的方法進行準確性驗證，ELISA方法和HPLC方法的相關(guān)性較高，R2=0.986。CGI