三嗪類(lèi)除草劑撲草凈快速免疫檢測(cè)方法的研究.pdf

1、本論文對(duì)三嗪類(lèi)除草劑撲草凈的快速免疫檢測(cè)方法進(jìn)行了深入、系統(tǒng)的研究。建立了簡(jiǎn)便、快速、實(shí)用的撲草凈免疫檢測(cè)方法——直接競(jìng)爭(zhēng)酶聯(lián)免疫檢測(cè)方法(dc-ELISA)和膠體金免疫層析試紙條檢測(cè)方法(CGIA)。
　　通過(guò)合成撲草凈半抗原，利用活化酯法連接載體蛋白(BSA)作為免疫原，制備出高效價(jià)、高特異性的多克隆抗體。對(duì)ELISA方法的工作條件（抗體包被量，酶標(biāo)抗原稀釋度，封閉液種類(lèi)和濃度等）進(jìn)行優(yōu)化，對(duì)影響實(shí)驗(yàn)的各因素（離子強(qiáng)度，pH值

2、等）進(jìn)行了研究，最終確定方法的最佳工作條件為:抗體包被量為0.25μg/孔，酶標(biāo)抗原的稀釋度為1∶50000，封閉液為0.5％乳粉，樣品稀釋液為1×PBS，pH=7.4。在此條件下建立ELISA方法的靈敏度(IC50)為0.3±0.03ng/mL，最低檢出限(IC15)為0.04±0.006ng/mL?？贵w對(duì)撲滅津和撲滅通的交叉反應(yīng)率分別為71.4％和50％，對(duì)其他幾種結(jié)構(gòu)類(lèi)似的三嗪類(lèi)除草劑的交叉反應(yīng)率較低。在對(duì)實(shí)際樣品進(jìn)行檢測(cè)的研究中

3、，選擇海河水、土壤、和大米作為研究對(duì)象考查了它們的基質(zhì)影響及其去除方法，并進(jìn)行添加回收實(shí)驗(yàn)。直接競(jìng)爭(zhēng)酶聯(lián)免疫檢測(cè)方法的回收率在80-120％。海河水、土壤、大米中撲草凈的檢出限分別為0.4ng/mL、0.8μg/kg和0.8μg/kg。
　　采用檸檬酸三鈉還原法制備出粒徑為17.4nm的膠體金粒子，對(duì)CGIA方法的工作條件（包被抗原、羊抗兔二抗和金標(biāo)抗體的稀釋倍數(shù)、NC膜的封閉條件、金標(biāo)墊處理液的種類(lèi)等）進(jìn)行優(yōu)化。最終確定方法最佳

4、工作條件為:包被原稀釋倍數(shù)為1∶15，羊抗兔二抗稀釋倍數(shù)為1∶300，金標(biāo)抗體的稀釋倍數(shù)為1∶10，NC膜不做封閉，金標(biāo)墊用10％蔗糖、5％BSA、0.1％吐溫、0.1％疊氮鈉處理。建立的方法檢出限為5ng/mL，5min內(nèi)可以通過(guò)目測(cè)進(jìn)行結(jié)果判斷。海河水不需要任何處理可以直接進(jìn)行檢測(cè)，檢出限為5ng/mL。
　　通過(guò)高效液相色譜法對(duì)本研究建立的方法進(jìn)行準(zhǔn)確性驗(yàn)證，ELISA方法和HPLC方法的相關(guān)性較高，R2=0.986。CGI