固定化及透性化對瑞士乳桿菌L7生產(chǎn)共軛亞油酸的影響.pdf

1、共軛亞油酸(coniugatedlinoleicacid,CLA)是一系列含共軛雙鍵的亞油酸的位置(8,1O-、9,11-、10,12-、11,13-)和幾何(cis,cis;cis,trans;trans,cis;trans,trans)異構(gòu)體的混合物的總稱。CLA具有抗癌、抗腫瘤、提高免疫力、減少脂肪沉積等生理功能。在CLA的多種異構(gòu)體中,9c,11t-CLA和10t12c-CLA均具有獨特的生理活性。天然CLA主要存在于反芻動物的

2、肉和乳制品中且含量很少,因此,利用生物轉(zhuǎn)化法制備CLA是一個很好的途徑。
　　 以本實驗室分離保存的一株高產(chǎn)9c,11t-CLA的瑞士乳桿菌L7(L.helveticusL7)為材料,首先通過發(fā)酵條件優(yōu)化,提高亞油酸(LA)在發(fā)酵液中的生物轉(zhuǎn)化率,增加9c,11t-CLA的產(chǎn)量,進(jìn)而對其細(xì)胞進(jìn)行透性化處理以提高細(xì)胞膜的通透性,并對透性化處理細(xì)胞進(jìn)行固定化,研究了固定化細(xì)胞的理化性質(zhì)和轉(zhuǎn)化特性。主要結(jié)果如下:
　　 1)優(yōu)

3、化了菌種發(fā)酵產(chǎn)9c,11t-CLA的最佳條件。確定L.helveticusL7發(fā)酵的最適菌體濃度為5×1010CFU/mL左右。在發(fā)酵進(jìn)行到36h時發(fā)酵液中的9c,11t-CLA達(dá)到最高值。底物L(fēng)A的最適添加濃度為1mg/mL。
　　 2)對L.helveticusL7細(xì)胞透性化條件進(jìn)行了研究。分別使用十六烷基三甲基溴化銨(CTAB)、乙醚、乙醇、CTAB、甲苯以及溶菌酶對L.helveticusL7進(jìn)行透性化處理,結(jié)果表明:透

4、性化處理的效果最好的是20％的乙醇,室溫下處理30min,制得的透性化細(xì)胞的產(chǎn)率達(dá)到468μg/mL;對超聲波細(xì)胞破碎法制得的亞油酸異構(gòu)酶粗酶液的操作穩(wěn)定性和貯藏穩(wěn)定性進(jìn)行研究,結(jié)果表明:粗酶液的酶活操作穩(wěn)定性較差;保存于4℃時酶活性逐步降低,120h后酶活降至初始活性的35%左右。經(jīng)溶菌酶處理的透性化細(xì)胞轉(zhuǎn)化率也較高。透性化細(xì)胞的酶活穩(wěn)定性較粗酶液有較大提高。
　　 3)應(yīng)用響應(yīng)面方法對透性化細(xì)胞的最佳固定化的條件進(jìn)行了優(yōu)化。

5、結(jié)果表明海藻酸鈣膠珠最佳固定化條件為:海藻酸鈉濃度1.78%、氯化鈣濃度3.13%、固定化時間60.30min,利用在此條件下制備所得的固定化膠珠進(jìn)行發(fā)酵,9c,11t-CLA的產(chǎn)量達(dá)到561μg/mL,。與未固定細(xì)胞相比,固定化細(xì)胞單次9c,11t-CLA產(chǎn)量沒有明顯的變化,但固定化細(xì)胞可多次重復(fù)利用,重復(fù)利用5次后活力沒有明顯降低,9c,11t-CLA產(chǎn)量保持在549μg/mL。于4℃貯存120h后酶活無明顯下降,保留在90%以上,