產(chǎn)共軛亞油酸丙酸菌的分離及發(fā)酵條件的研究.pdf

1、共軛亞油酸是一種非常重要的不飽和脂肪酸，可看作亞油酸的衍生物。具有抗癌、抗粥狀動(dòng)脈硬化、提高機(jī)體免疫力等頗為引人注意的生理功能，廣泛地應(yīng)用于醫(yī)藥、食品和飼料等工業(yè)。國(guó)外已經(jīng)研究了采用化學(xué)方法以及微生物轉(zhuǎn)化法獲取共軛亞油酸的多種工藝路線。近年來(lái)我國(guó)在化學(xué)方法以及微生物發(fā)酵法生產(chǎn)共軛亞油酸方面已開(kāi)始有少量的研究報(bào)道。 本論文對(duì)丙酸菌生物轉(zhuǎn)化法生成共軛亞油酸展開(kāi)研究，主要包括產(chǎn)共軛亞油酸的丙酸菌菌種篩選，丙酸菌轉(zhuǎn)化條件和高密度培養(yǎng)的研

2、究，以及混合微生物轉(zhuǎn)化工藝的研究等。 本文從青貯飼料和干酪中分離得到的十幾株疑似丙酸菌，對(duì)它們進(jìn)行產(chǎn)共軛亞油酸能力和發(fā)酵產(chǎn)物丙酸的篩選，最終得到3株產(chǎn)共軛亞油酸的丙酸菌，其中一株產(chǎn)共軛亞油酸較高的菌株HZ-P-65(共軛亞油酸產(chǎn)生能力15.743μg/mL)，采用細(xì)菌形態(tài)學(xué)、電鏡透射與掃描圖像分析、生理生化等研究，初步鑒定該菌株為一株費(fèi)氏丙酸桿菌。該菌株丙酸產(chǎn)量為9.64g/L，丙酸與乙酸之比接近3.5∶1。 對(duì)不同培養(yǎng)

3、基和培養(yǎng)條件進(jìn)行了初步優(yōu)化得出：培養(yǎng)基為MRS培養(yǎng)基，接種量為10％，培養(yǎng)溫度為30℃，在培養(yǎng)之初加入LA，底物L(fēng)A濃度為1000μg/mL，轉(zhuǎn)化時(shí)間為120h，添加吐溫-80作分散劑，LA和SO的比為1∶20時(shí)，CLA的最高產(chǎn)量達(dá)到40.033μg/mL。 研究了發(fā)酵技術(shù)對(duì)丙酸菌高密度培養(yǎng)及轉(zhuǎn)化合成CLA的影響。pH-stat培養(yǎng)技術(shù)一定程度上克服了因pH值下降、酸積累而引起的抑制作用，菌體密度較高，共軛亞油酸產(chǎn)量也相對(duì)提高。

4、丙酸菌在pH6.0進(jìn)行pH-stat培養(yǎng)，菌體密度可達(dá)12.42，CLA產(chǎn)量最高達(dá)45.801μg/mL。在此基礎(chǔ)上，進(jìn)行了間歇補(bǔ)料和連續(xù)補(bǔ)料培養(yǎng)，間歇補(bǔ)料培養(yǎng)菌體OD值最大達(dá)18.18，CLA產(chǎn)量最大值達(dá)50.934μg/mL；連續(xù)補(bǔ)料培養(yǎng)菌體OD值最大達(dá)17.35，CLA產(chǎn)量最大值達(dá)55.867μg/mL。 由于丙酸菌和乳酸菌之間存在互生作用，且這兩種菌均能轉(zhuǎn)化合成共軛亞油酸，所以，我們對(duì)丙酸菌和乳酸菌混合培養(yǎng)轉(zhuǎn)化合成共軛亞