高效液相色譜及電化學(xué)技術(shù)檢測幾種藥物生物小分子.pdf

1、高效液相色譜-電化學(xué)檢測(HPLC-ECD)聯(lián)用技術(shù)由于其靈敏度高、選擇性好、響應(yīng)快、造價低等優(yōu)點，已廣泛用于醫(yī)藥、生物、化學(xué)和環(huán)境等領(lǐng)域。由于電化學(xué)檢測器只對電活性物質(zhì)有響應(yīng)，因此有選擇性。石墨烯是一種較新的碳納米材料，由于其優(yōu)良的電化學(xué)性能，現(xiàn)已廣泛用于電化學(xué)和生物傳感領(lǐng)域。本學(xué)位論文在簡要綜述HPLC-ECD在藥物分析領(lǐng)域和石墨烯復(fù)合物在生物傳感領(lǐng)域的應(yīng)用的基礎(chǔ)上，自制了一種噴壁/薄層電化學(xué)檢測池和幾種石墨烯復(fù)合物，并用于藥物/生

2、物小分析的檢測。主要研究工作如下:
　　1.在自制的噴壁/薄層電化學(xué)檢測器(ECD)上，采用梯度洗脫高效液相色譜(HPLC)同時檢測了異煙肼(INH)和利福平(RIF)。選用Shim-PackVP-ODS(150mm×4.6mm)色譜柱，流速1.0mLmin-1，柱溫40℃，進(jìn)樣量20μL，紫外檢測波長為268nm，安培檢測電位為0.9VvsSCE。在選定的色譜條件下，INH和RIF都在0.01-100μM范圍內(nèi)成良好的線性關(guān)系(

3、r2=0.999)，最低檢測濃度分別為0.3nM和0.5nM（S/N=3），比相同條件下的紫外檢測器和商品電化學(xué)檢測器更好。這種噴壁/薄層ECD中的工作電極可以捕獲更多的電活性物質(zhì)，從而改善安培響應(yīng)，使電極表面的清洗和更新更簡便。方法靈敏度高、簡捷快速、重現(xiàn)性好，可用于異煙肼和利福平的復(fù)方藥測定和尿液檢測。
　　2.通過循環(huán)伏安法在玻碳電極上電沉積氧化石墨烯制得了ERGO/GCE，再通過金銅電化學(xué)共沉積/溶銅法(CS)法制得了多孔

4、金納米粒子/電還原氧化石墨烯復(fù)合物修飾電極(AuCS/ERGO/GCE)，再將該修飾電極用于噴壁/薄層電化學(xué)檢測池中，與高效液相色譜結(jié)合用于同時檢測異煙肼和利福平。這里的鍍金可加固氧化石墨烯電還原物在電極上的修飾。在選定的色譜條件下，INH和RIF都在0.01-60μM濃度范圍內(nèi)成良好的線性關(guān)系(r2=0.99)，最低檢測濃度分別為0.2nM和0.6nM（S/N=3）。在該修飾電極上，異煙肼的過電位顯著降低，異煙肼和利福平的氧化峰電流增

5、大。該修飾電極在噴壁/薄層電化學(xué)檢測池中表現(xiàn)出良好的重現(xiàn)性和穩(wěn)定性，實現(xiàn)了同時檢測復(fù)方制劑中異煙肼和利福平。
　　3.采用電還原羧基化石墨烯(ERCG)與電聚合磺基水楊酸(PSA)共同修飾玻碳電極，制備了同時分析異煙肼(INH)和尿酸(UA)的電化學(xué)傳感器。通過QCM技術(shù)研究了電極的制備過程，采用掃描電子顯微鏡和交流阻抗法對ERCG/PSA復(fù)合膜的形態(tài)學(xué)和界面性能進(jìn)行了表征。通過循環(huán)伏安法(CV)和微分脈沖伏安法(DPV)考察了I

6、NH和UA在修飾電極上的催化氧化行為。在NH3-NH4Cl緩沖液(pH9.0)中，與裸玻碳和PSA修飾電極相比，ERCG/PSA修飾電極顯著增大了異煙肼和尿酸的電氧化信號。在優(yōu)化實驗條件下，INH和UA分別在0.05μM～15μM、0.02μM～15μM范圍內(nèi)其DPV-氧化電流與濃度呈線性關(guān)系，檢測限都為12nM。此外，ERCG/PSA修飾電極制備過程簡便、在檢測INH和UA時體現(xiàn)出好的重現(xiàn)性和高的靈敏度，并且能用于同時分析尿樣中的IN