副溶血弧菌噬菌體VPp1在牡蠣凈化中的應(yīng)用及其規(guī)模化制備和保存.pdf

1、副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)是一種主要的食源性致病菌,廣泛分布于海洋環(huán)境中并極易富集在牡蠣等海產(chǎn)貝類體內(nèi)。牡蠣味道鮮美、營養(yǎng)豐富,多數(shù)消費(fèi)者喜愛生食或者稍加烹調(diào)即食用,以此來保持其細(xì)膩的質(zhì)地和鮮美的風(fēng)味,若食用被該菌污染的牡蠣則會引起人體食物中毒,對公眾健康造成極大威脅。
　　為了探索行之有效的凈化牡蠣體內(nèi)副溶血弧菌的方法并將之推廣應(yīng)用于實(shí)際工廠操作中,本研究以副溶血弧菌噬菌體VPp1為研究對象,首

2、先將其用于活體牡蠣中副溶血弧菌的凈化,將噬菌體液加入牡蠣養(yǎng)殖水體中,取得明顯的凈化效果;在此基礎(chǔ)上將實(shí)驗(yàn)擴(kuò)大至凈化車間中并初步研究了該噬菌體規(guī)模化制備和保存條件,為該噬菌體的工業(yè)化應(yīng)用奠定基礎(chǔ)。主要研究結(jié)果如下:
　　1、將噬菌體 VPp1用于牡蠣體內(nèi)副溶血弧菌的凈化,發(fā)現(xiàn)其對牡蠣體內(nèi)的副溶血弧菌有明顯的凈化作用。在實(shí)驗(yàn)室規(guī)模中,初步得出適宜的凈化條件為:水溫16?C,噬菌體VPp1的添加濃度是MOI值為0.1。在此條件下經(jīng)過36

3、 h凈化,可使牡蠣體內(nèi)的副溶血弧菌數(shù)量降低2.35-2.76 log CFU/g。進(jìn)一步將凈化實(shí)驗(yàn)擴(kuò)大至工廠化規(guī)模,凈化36 h后,可以將染菌后牡蠣體內(nèi)的副溶血弧菌含量降低1.11 log CFU/g,另外對于牡蠣體內(nèi)富集的自然環(huán)境中的副溶血弧菌及其他海洋性弧菌的增殖可以起到抑制作用。整個凈化過程中噬菌體VPp1在不影響正常菌群的情況下可有效的裂解宿主菌并抑制其他弧菌增殖,并且不會對牡蠣的感官特性產(chǎn)生負(fù)面影響,能最大限度的降低牡蠣損失。

4、另外,該凈化過程具有所需設(shè)備簡便易得、成本較低的特點(diǎn),在貝類凈化中具有很大應(yīng)用潛力。
　　2、為了滿足噬菌體工業(yè)化生產(chǎn)的需求,將發(fā)酵技術(shù)用于噬菌體 VPp1的規(guī)模化制備,采用單因素實(shí)驗(yàn)得到了噬菌體增殖的最佳條件:培養(yǎng)基 pH為7.3,不需特意調(diào)節(jié);培養(yǎng)基中Ca2+、Mg2+的添加濃度為20 mmol/L;接種所用噬菌體MOI值為0.0001;培養(yǎng)溫度為37?C;培養(yǎng)轉(zhuǎn)速為200 r/min;培養(yǎng)時間為10-12 h,按照以上條件利

5、用5 L發(fā)酵罐進(jìn)行噬菌體的制備實(shí)驗(yàn),所得噬菌體的效價(10.74 log PFU/mL)增長幅度得到明顯提高,比對照組高出3.79個數(shù)量級。
　　3、為了篩選出適宜于噬菌體冷凍干燥后長期保存的保護(hù)劑,本研究將不同種類、不同濃度的保護(hù)劑用于噬菌體VPp1的冷凍干燥,并對凍干樣品的性質(zhì)進(jìn)行研究,結(jié)果表明:最適合噬菌體 VPp1進(jìn)行冷凍干燥保存的保護(hù)劑為海藻糖,適宜濃度為0.3 mol/L。此時,噬菌體凍干樣品具有很高的熱穩(wěn)定性,吸熱峰