可逆與吸附-包埋固定化酶研究.pdf

1、在缺乏長期穩(wěn)定的工藝條件下，游離酶存在難以回收和重復(fù)利用等缺點(diǎn)，因此在工業(yè)中的應(yīng)用受到了很大的限制。固定化酶解決了游離酶的上述缺點(diǎn)，提供了具有更強(qiáng)的穩(wěn)定性，重復(fù)或連續(xù)使用性能較好，容易從反應(yīng)液混合物中分離出來，同時又預(yù)防被微生物污染等優(yōu)點(diǎn)。而載體的性質(zhì)和酶的結(jié)構(gòu)決定了固定化酶保持高催化活性的性能。本論文選擇利用納米TiO2和海藻酸鈉兩者優(yōu)良性質(zhì)的結(jié)合，形成以吸附和包埋法相結(jié)合的固定化酶載體，同時利用Eudragit L-100的pH敏感

2、性，形成可逆固定化酶載體，在此基礎(chǔ)上選擇木瓜蛋白酶為模型蛋白對上述兩種載體的固定化條件進(jìn)行探討和分析；進(jìn)一步對固定化粗酶中含有的三種酶的活性條件進(jìn)行了分析，并利用其催化甘油生產(chǎn)1，3-丙二醇。具體主要有以下幾個方面的研究：
　　1，對可逆固定化木瓜蛋白酶條件的探討：1)確定固定化載體Eudragit L-100最佳濃度為20g/L，而最佳時間為10min，重復(fù)使用5次后，其吸附率仍然可以達(dá)到94.6％；2)然后對固定化木瓜蛋白酶活

3、性最適合pH為9，溫度為45℃，重復(fù)使用5次后，酶活性仍然可以達(dá)到83%，同時對固定化酶進(jìn)行了紅外分析，得出Eudragit L-100很好的負(fù)載了木瓜蛋白酶。
　　2，對吸附-包埋固定化木瓜蛋白酶條件的探討：1)得出TiO2的吸附作用對固定化木瓜蛋白酶起到了非常重要的作用，使其吸附率達(dá)到了85.6%，同時二氧化鈦性質(zhì)的影響也很重要，粒徑越小、比表面積越大，其吸附率越大，同時穩(wěn)定性也最好。由此得出二氧化鈦用于吸附-包埋固定化木瓜蛋

4、白酶的較適合粒徑為10nm、比表面積為280m2/g：2)對于海藻酸鈉的探討中得出最佳的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為3%，而氯化鈣的最佳濃度為1mol/L，并得出最佳固定化時間為25min。并對吸附-包埋固定化酶進(jìn)行了SEM、EDS和紅外分析，以分析出TiO2和吸附-包埋固定化木瓜蛋白酶的物理化學(xué)性質(zhì)，結(jié)構(gòu)和表面性質(zhì)。
　　3，對吸附-包埋法和可逆發(fā)固定的粗酶進(jìn)行了分析：分析了兩種載體固定的粗酶中含有的三種重要酶：GDH、PDOR和GDHt，在不同