白藜蘆醇聚合物膠束的研制.pdf

1、目的：白藜蘆醇（resveratrol，Res）是一種非黃酮類的多酚羥基化合物，普遍分布于葡萄、花生、買麻藤、松樹、虎杖、朝鮮槐等70多種植物中。白藜蘆醇為無色針狀晶體，在水中溶解度極低，但易溶于極性有機溶劑（如甲醇、乙醇、乙醚、四氯化碳等）。其具有抗菌、抗癌、抗血小板凝聚、保護心血管和雌激素樣作用等保健功能，已經在醫(yī)藥、功能性食品中有所應用。由于白藜蘆醇具有難溶于水、半衰期短、代謝和消除速率快、生物利用度低、穩(wěn)定性差等特性，大大的限制

2、了其臨床應用。本研究根據(jù)白藜蘆醇的疏水特性，制成聚合物膠束，旨在提高白藜蘆醇的水溶性、穩(wěn)定性并使其具有靶向作用。
　　方法：⑴白藜蘆醇聚合物膠束的制備：難溶性藥物白藜蘆醇的磷脂/脫氧膽酸鈉/PVP三元膠束（PC/BS/PVP-MMS）的制備：采用薄膜分散法，通過單因素考察確定制備條件，并通過藥物與磷脂質量比(A)、PVP用量(B)、磷脂與去氧膽酸鈉摩爾質量比(C)3個因素不同水平對制備工藝的影響進行L9(34)正交表研究，以增溶倍

3、數(shù)和包封率為標準篩選并確定最佳處方。按照最佳處方的比例稱取各成分置于圓底燒瓶中，加入一定量的有機溶劑，進行超聲溶解，通過減壓旋轉蒸發(fā)去除其中的有機溶劑，加入適量的生理鹽水，勻速振搖水化脫膜，用0.2μm微孔濾膜過濾即可得白藜蘆醇PBPM三元膠束；Res/mPEG-PLA聚合物膠束的制備：稱取嵌段共聚物與Res溶于適量有機溶劑中，緩慢逐滴加入快速攪拌的蒸餾水中。室溫下攪拌揮發(fā)除盡有機溶劑，得到澄清透明微帶淡藍色乳光的溶液，經0.45μm濾

4、膜過濾除去不溶性微粒，收集濾液，即為Res/mPEG-PLA膠束溶液。⑵白藜蘆醇聚合物膠束的鑒定方法：采用透射電鏡和粒徑檢測方法對白藜蘆醇聚合物膠束的形成進行驗證。⑶白藜蘆醇聚合物膠束的質量研究：建立了HPLC法測定白藜蘆醇聚合物膠束中的含藥量，并進行方法學考察。以粒徑、含藥量、包封率為指標進行影響因素試驗和加速試驗，以考察其穩(wěn)定性情況。⑷白藜蘆醇膠束的體外溶血性研究：取大鼠血制備紅細胞混懸液，按照處方量制備白藜蘆醇膠束。取多支試管，在

5、不同濃度的膠束中加入紅細胞混懸液，混勻后觀察并用分光光度法測定各組 A值，以此評價膠束溶血性。⑸藥動學試驗：以SD大鼠為受試動物，采用灌胃和尾靜脈兩種給藥方式。采用HPLC法測定灌胃和尾靜脈注射白藜蘆醇聚合物膠束后大鼠血液中藥物的濃度，對藥動學參數(shù)以及相對生物利用度進行研究。⑹細胞試驗：將人乳腺癌細胞MCF-7進行傳代和培養(yǎng)后，設置空白對照組、溶酶組以及Res和Res-MP膠束組，通過抑制率來評價對MCF-7細胞生長的抑制作用。⑺小鼠體

6、內抗腫瘤作用的研究：30只S180小鼠隨機分為空白對照組、生理鹽水組(陰性對照組)、環(huán)磷酰胺組(陽性對照組)及mPEG-PLA聚合物膠束組。
　　結果：①根據(jù)單因素考察結果，選取注射用大豆磷脂、脫氧膽酸鈉、PVPK30進行處方研究。通過L9(34)正交表研究，以增溶倍數(shù)和包封率為標準篩選并確定最佳處方：RES:磷脂:膽鹽:PVP=0.025:0.15:0.225:0.05。②根據(jù)處方考察結果，以共聚物mPEG1900-PLA800

7、0為載體，丙酮為溶劑，丙酮與水相的體積比為1:4，藥載比為35％制備白藜蘆醇嵌段共聚物膠束。③采用透射電鏡和粒徑檢測方法對白藜蘆醇聚合物膠束進行驗證。透射電鏡結果顯示，形成的聚合物膠束，外觀圓整，大小均一，粒徑在118nm左右。采用馬爾文粒度儀檢測粒徑，結果顯示粒徑在118—123nm，符合聚合物膠束的要求。表明白藜蘆醇聚合物膠束制備成功。④建立了HPLC法測定白藜蘆醇藥物含量的方法。考察的結果顯示，在10μg/mL～200μg/mL范

8、圍內的白藜蘆醇濃度和峰面積具有良好的線性關系，回收率、穩(wěn)定性以及精密度均符合方法學的要求。白藜蘆醇聚合物膠束的穩(wěn)定性試驗表明，在40℃高溫條件下，其外觀變?yōu)榘咨珳啙幔浜恳灿忻黠@的變化。在光照條件下，雖然其外觀無明顯變化，但含量變化很明顯，原因為白藜蘆醇在光照的條件下會發(fā)生順反異構和降解反應，故需要避光操作和保存。⑤白藜蘆醇膠束的體外溶血性研究：綜合觀察法和分光光度法結果，顯示在實驗濃度下PBPM組產生溶血作用，而Res-MP組溶血率

9、小于5%無溶血現(xiàn)象。⑥藥動學試驗：白藜蘆醇聚合物膠束的血管外給藥和尾靜脈注射采用梯形法進行數(shù)據(jù)處理，大鼠灌胃與尾靜脈注射Res-MP膠束相比，Tmax和MRT有所延長，而且峰濃度Cmax和AUC有所升高。⑦細胞試驗：Res-MP在1-1000μmol/L濃度范圍內對MCF-7細胞的生長具有抑制作用，抑制作用隨藥物濃度的增加和時間的延長明顯增強。⑧小鼠體內抗腫瘤作用的研究：Res-PM聚合物膠束組有較強抗腫瘤作用，Res-PM聚合物膠束組