洋蔥假單胞菌S31脂肪酶的分離提取及其在食品中應(yīng)用.pdf

1、脂肪酶(Lipase，EC3.1.1.3)是一類重要的甘油酯鍵水解酶，廣泛存在于動(dòng)物、植物各種組織及微生物中，可以在油水界面上催化脂類物質(zhì)分解、合成和酯交換等反應(yīng)。目前，脂肪酶是重要的工業(yè)酶制劑之一，廣泛應(yīng)用于生物能源(生物柴油合成)、油脂加工以及醫(yī)藥等行業(yè)。洋蔥假單胞菌(Pseudomonas cepacia)脂肪酶為位置非特異性脂肪酶，可以提高脂肪酶水解及轉(zhuǎn)酯反應(yīng)的效率。
　　 本文主要通過對(duì)洋蔥假單胞菌S31脂肪酶的發(fā)酵生

2、產(chǎn)、酶的分離提取進(jìn)行了研究，同時(shí)對(duì)洋蔥假單胞菌S31脂肪酶在小麥粉中及催化合成L-抗壞血酸脂肪酸酯的應(yīng)用展開了較深入的研究，并對(duì)洋蔥假單胞菌S31脂肪酶固定化進(jìn)行初探，為脂肪酶的應(yīng)用提供理論依據(jù)。主要研究內(nèi)容如下：
　　 1.洋蔥假單胞菌S31脂肪酶的分離提取。采用膜過濾、硫酸銨分級(jí)沉淀、冷凍干燥等手段分離提取洋蔥假單胞菌S31脂肪酶。結(jié)果表明，脂肪酶比活力由153.2UmL/mg提高到1203.9 UmL/mg，純化倍數(shù)為7.

3、858，回收率為43.92％。
　　 2.洋蔥假單胞菌S31脂肪酶在小麥粉中應(yīng)用。小麥粉中不同水平脂肪酶添加量結(jié)果表明，脂肪酶水解小麥粉中三油酸甘油酯，轉(zhuǎn)換成單油酸甘油酯與油酸；在添加量為0.5U/g時(shí)，類胡蘿卜素含量為0.49μ g/g，較對(duì)照組降低108.97％；脂肪酶添加量為0.4 U/g時(shí)，面筋蛋白和非面筋蛋白的-SH含量分別達(dá)到最低，為17.36 molμ/10g與6.87μmol/10g；添加量為0.3 U/g，小麥

4、粉非面筋蛋白與面筋蛋白-S-S-含量達(dá)到最大值，分別為8.56μ mol/10g與14.89μmol/10g。球蛋白、醇溶蛋白與麥谷蛋白的提取量在脂肪酶添加量分別為0.3 U/g、0.4U/g、0.2 U/g時(shí)達(dá)到最大值，為15.48μg/g、13.32μg/g、31.24μg/g；在脂肪酶添加量為0.3U/g時(shí)，面團(tuán)硬度彈性、咀嚼度最大值。
　　 3.洋蔥假單胞菌S31脂肪酶催化合成L-抗壞血酸脂肪酸酯研究。通過對(duì)加酶量、反應(yīng)

5、介質(zhì)、反應(yīng)溫度、底物摩爾比對(duì)脂肪酶催化反應(yīng)的影響研究，確定了最佳的反應(yīng)條件：有機(jī)反應(yīng)介質(zhì)為叔丁醇，豬油與L-抗壞血酸的摩爾比為3:1、酶用量為300U、溫度為50℃，轉(zhuǎn)化率可達(dá)到31.24％。在單因素實(shí)驗(yàn)的前期研究基礎(chǔ)上，選擇酶量，溫度、底物摩爾比、反應(yīng)時(shí)間4因素等關(guān)鍵因子，采用響應(yīng)曲面法進(jìn)行優(yōu)化。結(jié)果表明，當(dāng)加酶量327U、溫度49.3℃、底物比3.14、反應(yīng)時(shí)間29.7h時(shí)，在此優(yōu)化條件下，L-抗壞血酸脂肪酸酯得率為40.69％，驗(yàn)

6、證試驗(yàn)結(jié)果表明，Vc脂肪酸酯的轉(zhuǎn)化率為39.86％，與理論預(yù)測(cè)值吻合，證明這一模型是有效的。與單因子實(shí)驗(yàn)相比提高了近10個(gè)百分點(diǎn)。
　　 4.洋蔥假單胞菌S31脂肪酶固定化初探。通過對(duì)吸附介質(zhì)，給酶量，pH、吸附時(shí)間、吸附溫度、戊二醛濃度以及交聯(lián)時(shí)間對(duì)酶的固定化影響研究。結(jié)果表明，吸附載體大孔樹脂DM130、給酶量為493U/0.5g、pH7.5、吸附時(shí)間8h、吸附溫度25℃、戊二醛濃度為0.05％和交聯(lián)時(shí)間為2h。固定化脂肪酶