縮宮素粗品的分離純化新工藝研究.pdf

1、縮宮素是哺乳動(dòng)物和人垂體后葉激素的主要成分之一,臨床主要用于引產(chǎn)、促使排乳、子宮復(fù)位不良及預(yù)防產(chǎn)后出血等?？s宮素的生產(chǎn),過去主要通過對(duì)豬、牛腦垂體的組織提取進(jìn)行,現(xiàn)階段主要通過固相合成的方法進(jìn)行。無論是組織提取還是化學(xué)合成的縮宮素粗品都需要進(jìn)行分離純化,只有純度達(dá)到一定的要求才可以作為藥品使用。目前,縮宮素的分離純化主要采用兩步反相色譜的方法進(jìn)行,該方法由于反相介質(zhì)和流動(dòng)相的成本較高以及介質(zhì)損耗嚴(yán)重等導(dǎo)致分離純化成本很高,分離純化成本占

2、到縮宮素產(chǎn)品成本的二分之一左右。因此,開發(fā)高效、廉價(jià)的分離純化方法對(duì)縮宮素甚至多肽的發(fā)展都有著十分重要的意義。本研究以兩種常用的氫鍵吸附介質(zhì)作為分離純化介質(zhì),對(duì)固相合成縮宮素粗品進(jìn)行了分離純化研究,建立了聚酰胺脫鹽、Superose12純化的生產(chǎn)工藝。該方法相對(duì)于傳統(tǒng)反相色譜的方法具有介質(zhì)便宜、容易清洗再生和介質(zhì)利用率高等的特點(diǎn),并且分離過程多使用水和酸作為流動(dòng)相,分離純化成本很低,并且安全環(huán)保。具體研究?jī)?nèi)容和結(jié)果如下:
　　(1

3、)建立了縮宮素的反相高效液相色譜分析方法。具體色譜條件為:Shimadzu LC-10ATHPLC系統(tǒng);Agilent Eclipse XDB-C18色譜柱;流動(dòng)相A:5％ACN+0.1%TFA,流動(dòng)相B:90%ACN+0.1%TFA;梯度:0~20min,20%~50%B;流速1.0ml/min;柱溫20℃;檢測(cè)波長(zhǎng)215nm;進(jìn)樣量20μl。該方法和傳統(tǒng)反相高效液相色譜對(duì)多肽的分析方法相比,可以在較短的時(shí)間內(nèi)得到較高的分辨率。適合于

4、縮宮素固態(tài)粗品、液態(tài)粗品以及分離純化后縮宮素樣品的分析。
　　(2)在聚酰胺色譜柱上通過不同濃度乙腈對(duì)縮宮素標(biāo)準(zhǔn)品的等度洗脫,對(duì)縮宮素在聚酰胺色譜柱上的保留機(jī)理進(jìn)行了討論,縮宮素在聚酰胺上的保留為氫鍵吸附和疏水作用共同作用的模式。
　　(3)建立并優(yōu)化了縮宮素固態(tài)粗品的聚酰胺純水等度洗脫粗分離的方法,該方法對(duì)固態(tài)粗品可以實(shí)現(xiàn)很好的脫鹽和一定的粗分離效果。在優(yōu)化后的分離條件下,對(duì)固態(tài)粗品的粗分離純度可達(dá)65.8%,回收率為72

5、.1%。和傳統(tǒng)的中低壓反相C18的脫鹽粗分離比,分離效果相當(dāng),但聚酰胺的方法具有更高的樣品載量,和更低的分離純化成本,并且有利于環(huán)境的保護(hù)。
　　(4)對(duì)縮宮素在Superose12色譜柱上的吸附機(jī)理進(jìn)行了討論,縮宮素在Superose12上的保留為氫鍵吸附和離子作用的混合模式。并建立了醋酸梯度洗脫對(duì)縮宮素粗品的分離純化方法。
　　(5)對(duì)縮宮素固態(tài)和液態(tài)粗品的直接一步Superose12分離純化結(jié)果表明,粗品中的鹽類對(duì)Su