豆芽三種激素(GA3、6-BA、2,4-D)的HPLC方法建立及指紋圖譜構(gòu)建.pdf

1、植物激素被廣泛運(yùn)用于現(xiàn)代農(nóng)業(yè)生產(chǎn)上，但激素的超標(biāo)使用，會對人體及牲畜的健康產(chǎn)生不良影響，引發(fā)疾病。豆芽生產(chǎn)中常使用的三種激素有:赤霉素(GA3，C19H22O6)、6-芐基腺嘌呤（6-BA，C12H11N5）、2，4-二氯苯氧乙酸(2，4-D，C8H6C12O3)。本實(shí)驗(yàn)在固定波長、等柱洗脫條件下，建立一種高效、便捷、同時測定豆芽中該三種激素的高效液相色譜方法，對其優(yōu)化，并進(jìn)行方法學(xué)評價;在所建立方法的基礎(chǔ)上，繪制豆芽三種激素檢測的安全

2、指紋圖譜，并進(jìn)行驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)。主要研究結(jié)果如下:
　　1.優(yōu)化了同時檢測三種激素（GA3、6-BA、2，4-D）的色譜條件。優(yōu)化結(jié)果為:ZORBAXSB-C18(4.6×150mm，5um)色譜柱、35℃柱溫、1.0mL/min流速、200nm波長、甲醇∶乙腈∶水（0.08％甲酸水溶液）=40∶10∶50(V∶V∶V)為流動相。此條件下，三種激素GA3、6-BA、2，4-D的保留時間分別為:3.557min、5.098min、20.7

3、98min;理論塔板數(shù)分別為:2916.973、3919.87、5419.053;分離度分別為:0、4.447、18.327，拖尾因子、不對稱度均接近于1，峰型正常。
　　2.對樣品預(yù)處理?xiàng)l件進(jìn)行優(yōu)化。在初步確定預(yù)處理步驟后，考察浸提液體積、超聲提取溫度、超聲提取時間、超聲提取次數(shù)、超聲提取功率、離心轉(zhuǎn)數(shù)、石油醚萃取次數(shù)、乙酸乙酯萃取次數(shù)、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)溫度9個因素對回收率的影響，并在單因素試驗(yàn)基礎(chǔ)上，運(yùn)用響應(yīng)面分析法進(jìn)行優(yōu)化。優(yōu)化得到

4、的最佳前處理?xiàng)l件為:浸提液體積15mL、超聲提取溫度30℃、超聲提取時間25min、超聲提取4次、超聲提取功率為270W（總功率的30％）、離心轉(zhuǎn)數(shù)4500r/min、石油醚萃取3次、乙酸乙酯萃取3次、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)溫度40℃。此時加標(biāo)回收率GA3為78.897％、6-BA為83.712％、2，4-D為95.916％。
　　3.方法學(xué)評價。結(jié)果表明:三種激素在0.0025～0.0150ug范圍內(nèi)呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系。GA3、6-BA、2，

5、4-D三種激素線性方程分別為:Y=3×106X+370.26（r=0.9999）、Y=7×106X-10249(r=0.9997)、Y=1×107X+1019.4(r=0.9997); LOD（最低檢出限）值分別為9.34×10-4ug/L、3.25×10-4 ug/L、1.75×10-4 ug/L。GA3、6-BA、2，4-D三種激素精密度實(shí)驗(yàn)結(jié)果RSD（相對標(biāo)準(zhǔn)偏差）值分別為0.97％、0.40％、0.36％;重復(fù)性實(shí)驗(yàn)結(jié)果RSD值

6、分別為1.80％、1.45％、1.96％;日內(nèi)穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)結(jié)果RSD值分別為1.20％，0.49％，0.97％。分別加標(biāo)4.0、5.0、6.0mg/kg情況下，GA3加標(biāo)回收率結(jié)果為:74.96％、77.12％、75.50％，RSD為:1.4％、2.9％、1.7％;6-BA加標(biāo)回收率結(jié)果為:80.58％、80.15％、82.07％，RSD為:2.4％、3.1％、1.2％;2，4-D加標(biāo)回收率結(jié)果為:93.14％、91.01％、94.56％

7、，RSD為:2.2％、2.0％、1.9％。樣品驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:雅安市售豆芽中，激素GA3、6-BA均未超標(biāo);2，4-D超標(biāo)較嚴(yán)重。
　　4.豆芽安全指紋圖譜構(gòu)建。將實(shí)驗(yàn)室自制豆芽的HPLC圖譜導(dǎo)入相似度計(jì)算軟件，采用平均值法，得到其對照指紋圖譜，即豆芽安全指紋圖譜，各樣本與該對照指紋圖譜的相似度均達(dá)到0.9以上，符合要求。在相同條件下，三種激素出峰時間不變，故本實(shí)驗(yàn)在不使用標(biāo)準(zhǔn)品前提下，將此安全指紋圖譜與市售豆芽HPLC圖譜在三