頭孢丙烯人體內(nèi)定量分析方法及其片劑健康人體生物等效性研究.pdf

1、頭孢丙烯為第二代半合成頭孢菌素類抗生素，是順式和反式兩種異構(gòu)體的混合體，順式異構(gòu)體與反式異構(gòu)體的含量比值約9∶1，被臨床廣泛應(yīng)用。目前已有文獻(xiàn)報(bào)道，均采用微生物法和高效液相色譜法測定人血漿中頭孢丙烯的濃度，但仍存在一定的局限性。
　　頭孢丙烯的順反異構(gòu)體不同于手性化合物的光學(xué)異構(gòu)體，在非手性條件下即可實(shí)現(xiàn)分離。本研究首次建立LC-MS/MS同時測定人血漿中順式頭孢丙烯、反式頭孢丙烯的定量分析方法;以國內(nèi)已經(jīng)批準(zhǔn)上市的原研藥頭孢丙烯

2、片（中美上海施貴寶制藥有限公司生產(chǎn)）為參比制劑，國產(chǎn)頭孢丙烯片（北京京豐制藥有限公司生產(chǎn)）為受試制劑，對國產(chǎn)頭孢丙烯和原研藥進(jìn)行生物等效性評價(jià);同時探討順反頭孢丙烯藥代動力學(xué)是否具有立體選擇性。
　　第一部分人血中順式頭孢丙烯和反式頭孢丙烯濃度測定方法的建立
　　目的:建立人血漿中順式頭孢丙烯和反式頭孢丙烯濃度的LC-MS/MS定量分析方法。
　　方法:在冰水浴條件下，以頭孢氨芐為內(nèi)標(biāo)，血漿樣本經(jīng)乙腈蛋白沉淀法處理后用

3、Synergi4u Hydro-RP80A色譜柱(150 mm×2.0 mm I.D.，4μm粒徑，美國Phenomenex Inc.)進(jìn)行分離，以甲醇-0.2％甲酸(25∶75，v/v)為流動相。采用電噴霧電離(ESI)源負(fù)離子模式、多反應(yīng)監(jiān)測(MRM)，用于定量分析的離子反應(yīng)分別為m/z388.0→m/z205.0（順式、反式頭孢丙烯）和m/z346.1→m/z268.1（內(nèi)標(biāo)頭孢氨芐）。
　　結(jié)果:在本研究建立的LC-MS/

4、MS樣本測定條件下，順式頭孢丙烯在0.125～16.0μg/mL血漿濃度范圍內(nèi)線性良好，r＞0.998，反式頭孢丙烯在0.0403～1.72μg/mL血漿濃度范圍內(nèi)線性良好，r＞0.998，順式和反式頭孢丙烯的定量下限分別為0.125μg/mL和0.0403μg/mL;順式頭孢丙烯批內(nèi)和批間精密度(RSD)均小于9.7％，準(zhǔn)確度(RE)在-0.8％～4.7％間，反式頭孢丙烯批內(nèi)和批間精密度(RSD)均小于6.5％，準(zhǔn)確度(RE)在0.6

5、％～2.2％間;順式頭孢丙烯的平均基質(zhì)效應(yīng)、平均回收率分別為(109.7±3.2)％和（80.5±1.9）％，反式頭孢丙烯的平均基質(zhì)效應(yīng)、平均回收率分別為（104.5±3.3）％和（80.2±2.8）％;順式頭孢丙烯和反式頭孢丙烯血漿樣本冰水浴中放置6h、處理后室溫放置10h、反復(fù)凍融3次和凍存于-80℃35 d后均穩(wěn)定。
　　結(jié)論:本研究首次建立了測定人血漿中頭孢丙烯濃度的LC-MS/MS分析方法，此方法是一種快速、靈敏、穩(wěn)定、

6、重現(xiàn)性高的質(zhì)譜方法。該法符合生物樣品分析要求，可用于頭孢丙烯片的生物等效性研究。
　　第二部分頭孢丙烯片劑健康人體生物等效性研究
　　目的:健康受試者單劑量空腹口服北京京豐制藥有限公司研制的頭孢丙烯片（受試制劑）與中美上海施貴寶制藥有限公司生產(chǎn)的頭孢丙烯片（參比制劑）后，通過已建立的測定人血漿中順式和反式頭孢丙烯濃度的LC-MS/MS定量分析方法，測定血漿中順式頭孢丙烯和反式頭孢丙烯的濃度，評價(jià)受試制劑與參比制劑是否具有生物

7、等效性。
　　方法:采用單中心、隨機(jī)、開放、雙周期、自身交叉的試驗(yàn)設(shè)計(jì)方法。24例健康男性受試者隨機(jī)交叉單劑量空腹口服頭孢丙烯片受試制劑或參比制劑各500 mg，于給藥前和給藥后0～11 h內(nèi)不同時間點(diǎn)采集血樣。采用LC-MS/MS定量分析方法測定順式和反式頭孢丙烯的血藥濃度，運(yùn)用WinNonlin6.3軟件(美國Pharsight Corporation)處理血藥濃度數(shù)據(jù)和計(jì)算藥代動力學(xué)參數(shù)，對AUC0-t、AUC0-∞和Cma

8、x經(jīng)對數(shù)轉(zhuǎn)換后進(jìn)行方差分析，采用雙向單側(cè)t檢驗(yàn)與90％置信區(qū)間法評價(jià)和判斷受試制劑和參比制劑是否具有生物等效性。
　　結(jié)果:24例男性健康受試者口服受試制劑和參比制劑500 mg后順式頭孢丙烯的主要藥代動力學(xué)參數(shù)AUC0-t分別為（28.91±3.76）μg·h/mL和（29.47±3.43）μg·h/mL，AUC0-∞分別為（29.27±3.80）μg·h/mL和(29.84±3.46)μg·h/mL，Cmax分別為（8.73±

9、1.22）μg/mL和（9.00±1.30）μg/mL，Tmax分別為1.38(1.00～4.00)h和1.50(1.00～3.00)h，t1/2分別為(1.30±0.14)h和（1.28±0.14）h;反式頭孢丙烯的主要藥代動力學(xué)參數(shù)AUC0-t分別為（2.70±0.38）μg·h/mL和（2.83±0.36）μg·h/mL，AUC0-∞分別為(2.73±0.38)μg·h/mL和(2.86±0.37)μg·h/mL，Cmax分別為(

10、0.906±0.143)μg/mL和（0.956±0.13）μg/mL，Tmax分別為1.50(1.00～4.00) h和1.50(1.00～3.00)h，t1/2分別為（1.05±0.19）h和（1.08±0.17）h;順式頭孢丙烯+反式頭孢丙烯的主要藥代動力學(xué)參數(shù)AUC0-t分別為(31.57±4.09)μg·h/mL和（32.29±3.72）μg·h/mL，AUC0-∞分別為（32.00±4.14）μg·h/mL和（32.69±3

11、.79）μg·h/mL，Cmax分別為（9.64±1.36）μg/mL和（9.94±1.43）μg/mL，Tmax分別為1.38(1.00～4.00)h和1.50(1.00～3.00))h，t1/2分別為（1.28±0.12）h和（1.25±0.15）h。
　　Cmax、AUC0-t和AUC0-∞經(jīng)對數(shù)轉(zhuǎn)換后進(jìn)行方差分析，兩種頭孢丙烯片的Cmax、 AUC0-t和AUC0-∞差異無顯著性(P＞0.05)。采用雙向單側(cè)t檢驗(yàn)與90％

12、置信區(qū)間法，24名受試者口服受試制劑和參比制劑500 mg后順式頭孢丙烯的AUC0-t、AUC0-∞90％置信區(qū)間分別為95.92％～100.03％、95.91％～99.98％。反式頭孢丙烯的AUC0-t、AUC0-∞90％置信區(qū)間分別為92.57％～98.10％、92.63％～98.09％。順式頭孢丙烯+反式頭孢丙烯AUC0-t、AUC0-∞90％置信區(qū)間分別為95.56％～99.73％、95.71％～99.81％。
　　結(jié)論: