甲芬那酸分散片在健康人體內(nèi)的藥代動力學(xué)及生物等效性研究.pdf

1、本文研究目的：建立高效液相色譜法(HPLC)測定人血清中甲芬那酸濃度的方法，探討其在健康人體內(nèi)的吸收、分布、消除(代謝和排泄)的動態(tài)變化特點。在此基礎(chǔ)上對甲芬那酸分散片與普通片進行生物等效性評價，為指導(dǎo)臨床制定安全、合理的用藥方案提供理論依據(jù)，為新藥審批和臨床用藥提供試驗依據(jù)，并為同類藥物試驗的方法建立提供參考。 研究方法： 第一部分是建立HPLC法測定人血清中甲芬那酸濃度的方法學(xué)。色譜條件：色譜柱：Discovery(

2、R)C18(250mm×4.6mm，5μm)；預(yù)柱：Discovery(R)C18(10mm×4mm，5μm)；流速：1.8mL·min-1；檢測波長：280nm；柱溫為室溫；流動相：乙腈-水(55：45，磷酸調(diào)pH3.0)；經(jīng)0.45μm微孔濾膜過濾，在線脫氣；進樣量100μL。血清樣品預(yù)處理方法為精取待測血清樣品0.5mL于尖底10mL的離心試管中，精密加入乙腈-乙醚(2∶1)的混合萃取液3mL，漩渦混合3min，離心10min(3

3、,500r·min-1)，精取上層3mL置于5mL的尖底試管中，在水浴37℃下，用N2流揮干，殘余物用200μL流動相定容，漩渦混合3min，取上清100μL進樣分析，外標法定量，Class-vp5.032色譜工作站自動計算并打印甲芬那酸的色譜峰面積，將峰面積代入標準曲線方程，求出甲芬那酸的血清藥物濃度。 第二部分是研究甲芬那酸分散片與普通片單劑量給藥在健康志愿者體內(nèi)的藥代動力學(xué)及生物等效性。本試驗采用標準二階段交叉設(shè)計自身對照

4、試驗方法，選取18名健康男性志愿受試者，隨機分成兩組。試驗前18名受試者的血、尿常規(guī)、肝、腎功及心電圖檢查均正常，無神經(jīng)系統(tǒng)疾病及藥物過敏史。按試驗方案設(shè)計要求，18名受試者于試驗前一天晚上19：00開始禁食，次晨采集服藥前靜脈血5mL，再分別單次口服甲芬那酸分散片或甲芬那酸普通片，于服藥后0.5、1、2、2.5、3、3.5、4、6、8、10、14h采取靜脈血5.0mL，所取靜脈血均離心后分離出血清，置于-20℃冷凍保存，待測。同時觀察

5、藥物的安全性。整個試驗期間配備有經(jīng)驗的醫(yī)生、護士監(jiān)護。本試驗采用外標法測定血清樣品中甲芬那酸的濃度。Tmax、Cmax采用實測值，AUC用統(tǒng)計矩方法計算，將血藥濃度時間數(shù)據(jù)經(jīng)3P97藥代動力學(xué)統(tǒng)計軟件處理，計算其它主要藥動學(xué)參數(shù)。并利用3P97統(tǒng)計軟件進行方差分析和雙單側(cè)t檢驗及(1-2α)％置信區(qū)間法分析兩種甲芬那酸制劑是否具有生物等效性。 研究結(jié)果： 1.本試驗條件下，HPLC的理論塔板數(shù)為5161，對稱因子為1.0

6、3，柱效良好。血清中藥物和基線分離良好且選擇性高，在0.13～8.28μgmL-1范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系(r=0.9993，n=6)，標準曲線方程為C=3.903×10-6A-0.01179。最低定量限(LOQ)為0.13μg·mL-1。血清中高、中、低三個濃度的方法回收率分別為(97.64±3.27)％、(97.85±3.69)％、(96.40±6.67)％，提取回收率分別為(91.61±1.36)％、(91.68±1.66)％

7、、(93.41±2.18)％；日內(nèi)變異系數(shù)分別為3.87％、5.15％、9.47％，日間變異系數(shù)分別為5.43％、8.47％、13.38％。凍融試驗在室溫6h內(nèi)和冰凍3個月的變異系數(shù)均小于10％。 2.18名健康男性志愿者單劑量口服500mg甲芬那酸分散片和普通片后的主要藥動學(xué)參數(shù)分別為Tmax(1.11±0.61)h和(2.08±0.79)h；Cmax(5.78±2.23)μg·mL-1和(5.91±3.04)μg·mL-1；

8、AUC(0-14h)(18.14±3.44)μg·h·mL-1和(17.29±4.97)μg·h·mL-1；AUC(0-∞(18.68±3.34)μg·h·mL-1和(17.97±4.94)μg·h·mL-1；t1/2Ke(2.03±0.79)h和(2.26±1.15)h；MRT(0-14h)(2.94±0.49)h和(3.44±0.87)h；MRT(0-∞)(3.32±0.73)h和(3.98±1.36)h，甲芬那酸分散片的相對生物利

9、用度Fr(0-14h)為(111.1±31.9)％；Fr(0-∞為(109.5±29.9)％。 3.生物等效性評價兩種制劑主要藥動學(xué)參數(shù)Cmax和AUC經(jīng)對數(shù)轉(zhuǎn)換后，采用方差分析、雙單側(cè)t檢驗以及90％置信區(qū)間法分析，Tmax采用Wilcoxon非參數(shù)秩和檢驗。結(jié)果表明，受試制劑甲芬那酸分散片AUC的90％可信限落在參比制劑甲芬那酸普通片96.0-120.0％范圍內(nèi)，Cmax的90％可信限落在參比制劑甲芬那酸普通片83.7-12

10、2.6％范圍內(nèi)，符合SFDA要求的90％置信區(qū)間(CI)在80％～125％的范圍內(nèi)。Tmax經(jīng)Wilcoxon符號秩和檢驗有顯著差異，這完全符合分散片的藥劑學(xué)特征。甲芬那酸分散片和普通片各主要藥動學(xué)參數(shù)間均無統(tǒng)計學(xué)差異(P＞0.05)，兩種制劑在人體內(nèi)具有生物等效性。 研究結(jié)論： 1.本試驗建立的HPLC分析方法準確性好，精密度高，選擇性強，操作簡便、快速、靈敏度高、重現(xiàn)性好。通過色譜圖分析，甲芬那酸周圍無雜峰干擾且分離

11、良好，日內(nèi)、日間精密度均小于15％，回收率大于85％。血清中甲芬那酸濃度在線性范圍內(nèi)，與相應(yīng)曲線下面積線性相關(guān)性良好。凍融實驗結(jié)果表明處理好的樣品在室溫條件下6h內(nèi)穩(wěn)定，待測血清樣品在-20℃的條件下3個月內(nèi)穩(wěn)定，這樣可以保證測試的準確性。該方法適用于人體血清中甲芬那酸的定量分析。所有效能指標均符合2005年版的《中國藥典》以及SFDA頒布的《化學(xué)藥物制劑人體生物利用度和生物等效性研究技術(shù)指導(dǎo)原則》關(guān)于進行藥動學(xué)及生物等效性研究的試驗要

12、求。 2.18名健康受試者隨機分成兩組口服單劑量的受試品和參比品500mg后，兩種制劑在受試者體內(nèi)的藥代動力學(xué)特征相似，與國外報道的關(guān)于甲芬那酸的藥動學(xué)參數(shù)接近。試驗表明，兩組之間Tmax有顯著性差異，甲芬那酸分散片較普通片達峰時間明顯提前，這完全符合分散片崩解時間短，藥物溶出迅速的特點。18名受試者的Cmax和AUC(0-14h)個體間的差異較大，但同一受試者服用分散片和普通片的Cmax和AUC(0-14h)較相近，這提示甲芬

13、那酸存在一定的個體差異，且服用分散片后達峰時間較普通片明顯加快，這些特點在臨床使用時應(yīng)加以注意。 3.將主要藥代動力學(xué)參數(shù)AUC(0-14h)、AUC(0-∞)和Cmax經(jīng)對數(shù)轉(zhuǎn)換后進行方差分析、雙單側(cè)t檢驗以及90％置信區(qū)間法進行生物等效性統(tǒng)計學(xué)分析，結(jié)果為拒絕接受二者不等效的假設(shè)(P＞0.05)；且兩種制劑在個體間、制劑間、周期間均無顯著性差異(P＞0.05)，受試制劑的AUC和Cmax的90％可信限落在參比制劑80％～12