豬血細(xì)胞中主要生物活性物質(zhì)聯(lián)合提取及性質(zhì)研究.pdf

1、豬血細(xì)胞作為一種優(yōu)質(zhì)的蛋白質(zhì)資源，因血細(xì)胞碎片的腥味以及血紅素的顏色，在食品工業(yè)中的應(yīng)用受到限制。開發(fā)豬血細(xì)胞不僅能夠增加用于生產(chǎn)藥品、食品等的原料資源，提高豬血細(xì)胞的利用率，而且能夠減少屠宰場廢棄物對環(huán)境的污染，具有良好的社會和經(jīng)濟(jì)效益。本論文從豬血細(xì)胞中聯(lián)合提取超氧化物歧化酶(SOD)、水解蛋白和血紅素，并對三種活性物質(zhì)的相關(guān)性質(zhì)進(jìn)行分析。主要研究內(nèi)容及結(jié)果如下:
　　1.SOD的提取、分離及純化以SOD的比活力為指標(biāo)，在單因

2、素基礎(chǔ)上，通過響應(yīng)面分析得到熱變性法提取SOD的最適工藝條件為水浴溫度為66℃，水浴時(shí)間為25min，硫酸銅添加量為3.10％。在此條件下，粗酶液的比活力為167.74U/mg。經(jīng)凝膠柱層析純化后酶液的比活力為6594.55U/mg，活力回收率為62.15％，純化倍數(shù)為39.14。
　　2.SOD的性質(zhì)研究經(jīng)紫外光譜分析純化物在262nm處有最大吸收峰。敏感性測試表明該純化物為Cu，Zn-SOD。原子吸收測定純化物中銅鋅個(gè)數(shù)之比約

3、為1∶1。聚丙烯酰胺凝膠電泳圖顯示純化物已達(dá)到電泳純。紅外光譜分析SOD的二級結(jié)構(gòu)以β-折疊為主，約占38.8％。金屬離子對SOD活力的影響表現(xiàn)為:Na+、K+、Zn2+隨濃度的增加激活作用增強(qiáng)，而隨濃度的增加，Ba2+、Cu2+、Ca2+對SOD的激活作用減弱，Mg2+、Fe2+、Al3+則表現(xiàn)為高濃度抑制，低濃度激活。不同糖類對SOD的活力影響:低濃度時(shí)，D-果糖、蔗糖、D-阿拉伯糖、D-半乳糖、葡萄糖對SOD有一定的穩(wěn)定作用。高濃

4、度時(shí)，D-甘露糖、D-木糖對SOD有一定的穩(wěn)定作用，L-鼠李糖對SOD活力影響較小。變性劑對SOD活力的影響:十二烷基硫酸鈉(SDS)和尿素隨濃度的增大抑制作用增強(qiáng);乙二胺四乙酸(EDTA)隨濃度的增加抑制作用減弱。有機(jī)酸對SOD活力的影響表現(xiàn)為:草酸和檸檬酸對SOD活力抑制作用較強(qiáng)。SOD對部分自由基都具有明顯的清除活性，其中對超氧陰離子的清除活性最強(qiáng)。
　　3.血紅素和水解蛋白聯(lián)合提取工藝優(yōu)化采用血紅素得率為指標(biāo)，選擇最適水解

5、蛋白酶。在單因素試驗(yàn)基礎(chǔ)上，通過響應(yīng)面分析優(yōu)化水解條件，得到堿性蛋白酶水解SOD提取殘?jiān)淖钸m條件為:酶解溫度為51℃，pH為8.4，底物濃度為9％，酶與底物之比為1.3％，在此條件下，血紅素得率為26.76％，水解蛋白得率為49.32％。
　　4.血紅素的性質(zhì)研究紫外光譜和紅外光譜分析確定提取物為血紅素。血紅素中含有蛋白質(zhì)69.62％，血紅素為20.72％，鐵為1.70％。熱分析表明血紅素從195.28℃開始進(jìn)行緩慢分解，具有較

6、好的熱穩(wěn)定性。人體腸胃消化模擬評價(jià)表明，血紅素的生物利用率為97.66％。
　　5.水解蛋白的性質(zhì)研究水解蛋白含有蛋白質(zhì)85.98％，分子量主要分布在2000～3000Da，約占51.43％;熱分析表明水解蛋白從139.23℃開始進(jìn)行緩慢分解，具有較好的熱穩(wěn)定性。水解蛋白與豬血細(xì)胞粉相比，功能特性有較大提高。其體外消化率為86.28％。抗氧化活性試驗(yàn)表明，水解蛋白對羥基自由基和DPPH自由基具有較好的清除作用，能夠抑制脂質(zhì)過氧化，