實驗性抗磷脂綜合征小鼠經(jīng)口服重組人β2糖蛋白1后Th17細(xì)胞及CD4+CD25highCD127lowT細(xì)胞的變化.pdf

1、目的：
　　抗磷脂綜合征，簡稱為APS，它是一種由抗磷脂抗體（APL）引起的自身免疫性疾病。通過大量的臨床觀察，它的主要癥狀表現(xiàn)為如下兩個方面：一是持續(xù)不斷的妊娠丟失；二是形成動靜脈血栓。本實驗?zāi)康氖茄芯拷?jīng)口服重組人β2糖蛋白1（rhβ2-GP1）后，實驗性抗磷脂綜合征（EAPS）小鼠的PBMC中輔助性T細(xì)胞17（Th17）和CD4+CD25highCD127lowT細(xì)胞的變化。
　　方法：
　　1、用重組人β2-GP

2、1免疫BALB/c小鼠建立EAPS模型組、用聯(lián)合口服重組人β2-GP1及重組人β2-GP1免疫小鼠的方法建立耐受組。
　　2、采用流式細(xì)胞術(shù)檢測方法，分別檢測EAPS模型組、口服耐受組和實驗對照組三組小鼠外周血 PBMC中 CD4+IL-17+Th17細(xì)胞百分率和CD4+CD25highCD127lowT細(xì)胞百分率。
　　3、應(yīng)用RT-PCR方法檢測各組小鼠PBMC的轉(zhuǎn)錄因子RORγt-mRNA的相對表達(dá)量和Foxp3 mR

3、NA的相對表達(dá)量。
　　結(jié)果：
　　1、采用流式細(xì)胞術(shù)檢測方法，分別檢測EAPS模型組、口服耐受組和實驗對照組三組小鼠外周血PBMC中CD4+IL-17+Th17細(xì)胞百分比，自免疫的第1個月到第5個月，模型組與正常對照組相比小鼠PBMC中CD4+IL-17+Th17細(xì)胞百分比略有升高，具有顯著差異性(p<0.05)。耐受組小鼠外周血 PBMC中CD4+IL-17+Th17細(xì)胞百分率在各時間段與對照組相比沒有不同，差異沒有顯著

4、性(p>0.05)。
　　2、免疫后第1、2、3、4、5個月，模型組小鼠PBMC的RORγt mRNA表達(dá)高于正常對照組小鼠（圖2，p<0.05）；耐受組小鼠PBMC的RORγt基因表達(dá)自免疫的第1個月到第5個月均低于模型組（p<0.05）；自免疫的第1個月到第5個月，對耐受組與正常對照組進(jìn)行比較結(jié)果沒有差別（p>0.05）。
　　3、模型組在第1個月和第2個月時與對照組相比雖然沒有差別(p>0.05)，但從第3個月開始下降

5、，差異開始逐漸呈現(xiàn)(p<0.05)。在免疫的第1、2、3、4、5個月，對照組小鼠與耐受組小鼠PBMC中CD4+CD25highCD127lowT細(xì)胞比較兩者沒有差別(p>0.05)。
　　4、在免疫的第1、2、3、4、5個月時對小鼠PBMC中轉(zhuǎn)錄因子Foxp3的相對表達(dá)量進(jìn)行檢測（如圖4），在第1、2個月，模型組小鼠表達(dá)水平與耐受組無差異（p>0.05）；第3月、4月、5月模型組與耐受組相比mRNA表達(dá)水平下降，差異具有顯著性（p

6、<0.05），在第1、2、3個月時，耐受組小鼠PBMC的Foxp3基因的表達(dá)高于對照組（p<0.05），4月和5月與正常對照組比較無明顯差異（p>0.05）；
　　結(jié)論：
　　1、EAPS模型組小鼠PBMC中Th17細(xì)胞的百分比及其轉(zhuǎn)錄因子RORγt mRNA的表達(dá)水平與對照組相比都略有升高,而通過口服重組人β2-GP1建立的耐受組小鼠的各項指標(biāo)均與對照組相近,故而我們認(rèn)為APS進(jìn)展Th17的過度分化可能有一定的關(guān)系。