轉(zhuǎn)基因創(chuàng)建矮牽牛、煙草早花種質(zhì)資源的研究.pdf

1、當(dāng)前,植物花發(fā)育機(jī)制已成為植物分子生物學(xué)研究的熱點(diǎn)之一。煙草、矮牽牛作為研究花發(fā)育的模式植物,同時(shí)矮牽牛又是一種在園林中廣泛應(yīng)用的花卉植物,對(duì)其開(kāi)花轉(zhuǎn)換的研究以及通過(guò)轉(zhuǎn)基因獲得變異植株,無(wú)論對(duì)植物花發(fā)育機(jī)制研究還是植物育種均具有重要的意義。本試驗(yàn)選用野生型矮牽牛、煙草及其不同轉(zhuǎn)基因突變株系為材料,以葉盤為外植體,將NT、PaFT基因通過(guò)根癌農(nóng)桿菌EHA105介導(dǎo),進(jìn)行遺傳轉(zhuǎn)化,獲得轉(zhuǎn)基因植株,并從形態(tài)、解剖和分子等水平,分析它們的異源表

2、達(dá)對(duì)轉(zhuǎn)基因植物生長(zhǎng)發(fā)育的影響,為NT、PaFT基因功能及后期的調(diào)控機(jī)理研究奠定基礎(chǔ),同時(shí)創(chuàng)造更多新的早花煙草、矮牽牛種質(zhì)資源。主要結(jié)果如下:
　　 1.通過(guò)農(nóng)桿菌介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)化獲得花期顯著提前的NT轉(zhuǎn)基因煙草和矮牽牛突變株。與對(duì)照相比,轉(zhuǎn)基因植株株型矮小,開(kāi)花轉(zhuǎn)換時(shí)葉數(shù)顯著減少,分枝數(shù)增多,且每一個(gè)分枝都能發(fā)育轉(zhuǎn)變成花序枝而開(kāi)花結(jié)實(shí)。另外,轉(zhuǎn)基因植株莖細(xì),質(zhì)感硬,石蠟切片初步顯示其木質(zhì)化程度比對(duì)照高。
　　 2.以轉(zhuǎn)NT

3、基因獲得的早花煙草的葉片為外植體,確定了其作為遺傳轉(zhuǎn)化受體系統(tǒng)的二次轉(zhuǎn)化選擇壓力。結(jié)果表明,30 mg/L的潮霉素即可導(dǎo)致早花煙草葉片失去分化能力,還可導(dǎo)致試管苗失去分化不定根的能力。300 mg/L的頭孢霉素做為抑菌劑,對(duì)不定芽和不定根的分化能力均影響不大。
　　 3.以轉(zhuǎn)NT基因獲得的含nptⅡ選擇標(biāo)記基因的早花煙草葉片為外植體,摸索了其根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)的二次遺傳轉(zhuǎn)化體系。通過(guò)導(dǎo)入含hpt選擇標(biāo)記基因的GUS報(bào)告基因,經(jīng)檢測(cè)得