半水硫酸鈣-硅酸三鈣復(fù)合物對(duì)兔骨髓基質(zhì)干細(xì)胞增殖和成骨向分化的影響研究.pdf

1、目的：
　　評(píng)價(jià)半水硫酸鈣/硅酸三鈣復(fù)合骨水泥對(duì)兔骨髓基質(zhì)干細(xì)胞(rabbit bonemarrow stromal cells，rBMSCs)增殖和成骨方向分化的生物學(xué)行為的影響，為其成為骨缺損替代材料提供生物學(xué)依據(jù)。
　　方法：
　　1、分組:實(shí)驗(yàn)組為半水硫酸鈣/硅酸三鈣復(fù)合物，對(duì)照組為半水硫酸鈣，分別制備各組材料的浸提液，常規(guī)培養(yǎng)液為陰性對(duì)照。
　　2、rBMSCs的原代培養(yǎng)及鑒定。
　　3、噻唑藍(lán)(

2、methyl thiazolyl tetrazolium，MTT)法分析兩組材料對(duì)骨髓基質(zhì)干細(xì)胞的毒性，篩選材料適宜濃度。
　　4、流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞周期并計(jì)算增殖指數(shù)，分析兩種材料對(duì)骨髓基質(zhì)干細(xì)胞增殖的影響。
　　5、采用堿性磷酸酶(alkaline phosphatase，ALP)和骨鈣素(osteocalcin，OCN)含量測(cè)定技術(shù)分析兩種材料對(duì)rBMSCs成骨向分化的影響。
　　結(jié)果：
　　1、細(xì)胞原代培

3、養(yǎng)與鑒定:顯微鏡下可見(jiàn)，原代rBMSCs以長(zhǎng)梭形為主，融合的細(xì)胞以放射狀或旋渦狀方式排列生長(zhǎng)。5代以內(nèi)傳代細(xì)胞形態(tài)與原代細(xì)胞相似，在傳代的第3天到第6天細(xì)胞進(jìn)入對(duì)數(shù)增殖期。經(jīng)成骨誘導(dǎo)液定向誘導(dǎo)分化后，堿性磷酸酶染色顯示，誘導(dǎo)細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)呈深藍(lán)色;茜素紅染色見(jiàn)誘導(dǎo)細(xì)胞胞間有明顯深染的鈣結(jié)節(jié)形成。
　　2、MTT檢測(cè)結(jié)果顯示:與對(duì)照組相比適宜稀釋比(1/40)的半水硫酸鈣/硅酸三鈣復(fù)合物浸提液對(duì)rBMSCs無(wú)毒性作用，可以促進(jìn)細(xì)胞的增

4、殖(P＜0.05）。選擇1/40稀釋比的材料浸提液用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
　　3、流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞周期:rBMSCs在兩組材料浸提液中的增殖指數(shù)均大于陰性對(duì)照組(P＜0.05），但兩組材料間差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。這表明適宜稀釋比的半水硫酸鈣/硅酸三鈣復(fù)合物能促進(jìn)rBMSCs的增殖。
　　4、ALP定量檢測(cè):10、14d時(shí)，rBMSCs在半水硫酸鈣/硅酸三鈣復(fù)合物浸提液中ALP的表達(dá)量高于陰性對(duì)照組和純半水硫酸鈣組（P＜0.05），

5、而后兩組間ALP表達(dá)量差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。表明半水硫酸鈣/硅酸三鈣復(fù)合物能促進(jìn)rBMSCs的分化。
　　5、OCN定量檢測(cè):三組細(xì)胞的OCN值從10、14、17、21 d隨時(shí)間逐漸升高，在14、17、21 d時(shí)，rBMSCs在半水硫酸鈣/硅酸三鈣復(fù)合物浸提液中OCN的表達(dá)量高于陰性對(duì)照組和純半水硫酸鈣組(P＜0.05），而后兩組間OCN表達(dá)量差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。表明半水硫酸鈣/硅酸三鈣復(fù)合物能促進(jìn)rBMSCs的分化。