人工關節(jié)硅酸二鈣涂層離子液對體外培養(yǎng)間充質干細胞增殖、成骨分化的影響.pdf

1、目的：通過體外培養(yǎng)、純化、擴增MSCs及擴增后的MSCs與硅酸二鈣涂層離子液復合培養(yǎng)，探討硅酸二鈣涂層離子液對體外培養(yǎng)MSCs增殖的影響，并通過測定MSCs成骨分化及成骨分化相關基因的表達情況，探討硅酸二鈣涂層離子液對體外培養(yǎng)MSCs成骨分化及成骨分化特異性基因表達的影響及其可能機制。
　　 方法：實驗共分四組：A組：空白組；B組：硅酸二鈣涂層離子液組；C組：成骨誘導劑組；D組：成骨誘導劑+硅酸二鈣涂層離子液組，各組中分別接種來

2、自體外采用密度梯度離心法分離人骨髓單個核細胞并通過貼壁培養(yǎng)純化、擴增后的骨髓MSCs，并通過流式細胞儀測定細胞表面抗原CD34、CD44鑒定細胞。采用倒置顯微鏡觀察MSCs不同時期的細胞形態(tài)，MTT法測定MSCs3、7、10、14d細胞增殖情況；生化法測定3、7、14dMSCs細胞內堿性磷酸酶(ALP)活性，RT-PCR檢測14d成骨細胞特異性轉錄因子(Cbfal)、骨鈣素(OC)基因表達情況，并進行初步比較。
　　 結果：采用

3、Percoll密度梯度離心結合貼壁篩選法在體外能夠培養(yǎng)出純度較高的MSCs，流式細胞儀測定細胞表面抗原CD44，CD34陽性率分別為94.83％、3.39％，顯示均一性較好。在整個培養(yǎng)過程中，各組MSCs細胞在3d～7d快速增殖，7d～10d趨于平緩，10d～14d呈下降趨勢。與A組相比，B、C、D各組MSCs增殖在各培養(yǎng)時間點都增強，特別是D組在7d和14d時的差異具有顯著統(tǒng)計學意義（P＜0.01），在3d和10d時的差異具有統(tǒng)計學意

4、義(P＜0.05)，同時，B組在7d時、C組在10d時的差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；與D組相比，B組在7、10、14d時、C組在7d時差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。MSCs細胞內ALP活性在3d～7d逐漸增強，7d～14d呈下降趨勢，而與A組相比，B、C、D組MSCs細胞內ALP活性在各時間點均高，其中C、D組的差異有顯著統(tǒng)計學意義(P＜0.01)，B組在14d時的差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。與B組相比，C、D組在3

5、、7、14時的差異有顯著統(tǒng)計學意義（P＜0.01）。在14d時，MSCs成骨分化晚期標志OCmRNA的表達C、D組明顯高于A、B組，同時，D組高于C組；B組高于A組。而成骨分化早期標志CafalmRNA的表達B組明顯高于A組，C組高于D組。
　　 結論：采用Percoll密度梯度離心結合貼壁篩選法在體外能夠培養(yǎng)出純度較高的MSCs;硅酸二鈣涂層離子液自身能夠在一定程度上促進MSCs增殖，并誘導其向成骨分化；同時，與成骨誘導劑協(xié)同