乙?；⒐艿鞍爪猎贏c-SDKP抗矽肺纖維化中的作用.pdf

1、目的：研究N-乙?；?絲氨酰-天門(mén)冬氨酰-賴氨酰-脯氨酸（Ac-SDKP）通過(guò)對(duì)乙?；⒐艿鞍爪粒ˋc-α-Tub）的調(diào)節(jié)，抑制矽肺大鼠纖維化的作用及其機(jī)制。并分析Ac-α-Tub在不同器官纖維化模型中的差異表達(dá)及其病理學(xué)特點(diǎn)。
　　方法：采用支氣管非暴露式一次性灌注 SiO2構(gòu)建矽肺大鼠模型，實(shí)驗(yàn)分組為：對(duì)照4、8周組；矽肺模型4、8周組；Ac-SDKP抗纖維化治療組和預(yù)防治療組。原代培養(yǎng)大鼠肺成纖維細(xì)胞，實(shí)驗(yàn)分組為：對(duì)照組、A

2、ng II誘導(dǎo)組、Ac-SDKP預(yù)處理組、纈沙坦（valsartan）預(yù)處理組和組蛋白去乙?；福℉DAC）6抑制劑（TCS HDAC620b）預(yù)處理組。采用HOPE-MED8050動(dòng)式染塵系統(tǒng)構(gòu)建大鼠矽肺模型，設(shè)對(duì)照組及染塵2、4、8、16、24周組；單側(cè)輸尿管梗阻（UUO）模型分為對(duì)照組，模型1、2、3周組；硫代乙酰胺（TAA）構(gòu)建肝纖維化模型，分為對(duì)照組，模型1、3、6周組。HE染色觀察病理形態(tài)。免疫組化和免疫熒光法檢測(cè)Ac-α-

3、Tub、α-平滑肌肌動(dòng)蛋白（SMA）、波形蛋白（vimentin）、肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白（SP-A）在組織中的定位和表達(dá)。免疫印跡法檢測(cè)Ac-α-Tub、I型膠原、α-SMA、HDAC6的蛋白表達(dá)水平。
　　結(jié)果：1、免疫組化結(jié)果顯示，Ac-α-Tub除可強(qiáng)表達(dá)于支氣管上皮細(xì)胞外，還可在肺泡壁上肺泡 II型上皮細(xì)胞、成纖維細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞中陽(yáng)性表達(dá)，而在結(jié)節(jié)內(nèi)缺失表達(dá)，使用不同公司商品化抗體均獲得一致的結(jié)果。α-SMA除在氣管、血

4、管的平滑肌細(xì)胞內(nèi)陽(yáng)性表達(dá)外，可強(qiáng)表達(dá)于矽結(jié)節(jié)區(qū)和間質(zhì)纖維化區(qū)域。免疫熒光結(jié)果顯示存在Ac-α-Tub和SP-A以及Ac-α-Tub和vimentin陽(yáng)性共表達(dá)的細(xì)胞。免疫印跡結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比，矽肺模型組I型膠原、α-SMA和HDAC6蛋白水平表達(dá)上調(diào)，而 Ac-α-Tub表達(dá)下調(diào)；予以 Ac-SDKP抗纖維化和預(yù)防治療能夠顯著上調(diào)Ac-α-Tub的表達(dá)，同時(shí)下調(diào)I型膠原、α-SMA和HDAC6蛋白水平。Ang II誘導(dǎo)的成纖維細(xì)胞

5、中α-SMA、HDAC6和I型膠原分別上調(diào)至對(duì)照組的1.66倍、3.56倍和4.00倍， Ac-α-Tub表達(dá)下調(diào)為對(duì)照組的44.44％（P<0.05）。給予 Ac-SDKP、纈沙坦或TCSHDAC620b預(yù)處理，能明顯抑制該變化。2、HE染色發(fā)現(xiàn)動(dòng)式染塵能夠形成較為分明的“細(xì)胞性矽結(jié)節(jié)-細(xì)胞纖維性矽結(jié)節(jié)-纖維細(xì)胞性矽結(jié)節(jié)”的病理學(xué)特征，免疫化和免疫熒光結(jié)果顯示，vimentin標(biāo)記的巨噬細(xì)胞多在結(jié)節(jié)內(nèi)高表達(dá)，而α-SMA標(biāo)記的肌成纖維

6、細(xì)胞多包裹巨噬細(xì)胞或位于間質(zhì)纖維化區(qū)域，偶見(jiàn)巨噬細(xì)胞α-SMA陽(yáng)性表達(dá)；而Ac-α-Tub表達(dá)于正常的肺泡壁上，而在矽結(jié)節(jié)及間質(zhì)纖維化區(qū)域缺失表達(dá)。3、免疫組化結(jié)果顯示，Ac-α-Tub在UUO模型中表達(dá)于近曲小管，在 TAA誘導(dǎo)的肝纖維化模型中其陽(yáng)性表達(dá)于星狀細(xì)胞，且隨著造模時(shí)間的延長(zhǎng)，陽(yáng)性表達(dá)的細(xì)胞逐步增多。Ac-α-Tub在主動(dòng)脈、心肌和骨骼肌細(xì)胞中均無(wú)陽(yáng)性表達(dá)，而在食管、胃和大腸的神經(jīng)細(xì)胞中陽(yáng)性表達(dá)，在肝臟組織中其陽(yáng)性表達(dá)于肝間