含脯氨酸二肽及極性二肽與金屬離子間相互作用的研究.pdf

1、二肽是由兩個(gè)氨基酸縮合而成的、構(gòu)成蛋白質(zhì)的最小肽單元，不僅在自然界中含量豐富，而且人工合成也較為簡(jiǎn)便。在生物體內(nèi)，金屬離子很少以自由離子的形式存在，多數(shù)是與蛋白質(zhì)和核酸等一些生物大分子形成復(fù)合物，進(jìn)而參與生命活動(dòng)過(guò)程。在已知的生物酶以及蛋白質(zhì)中，大約有三分之一的必須以金屬離子或金屬結(jié)合部位作為輔助因子，在調(diào)控各種生物機(jī)能時(shí)發(fā)揮活性中心或結(jié)構(gòu)中心的作用。由于蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)復(fù)雜多變，很難細(xì)致的研究其與金屬離子之間的作用方式、作用位點(diǎn)等，故選用二

2、肽與金屬離子作為研究對(duì)象，來(lái)了解它們之間的相互作用。本文主要研究了八種含脯氨酸的二肽與金屬離子及其在金屬離子的輔助下與DNA之間的相互作用，同時(shí)又利用核磁滴定的方法研究了部分極性二肽與金屬離子之間的相互作用。
　　首先，利用凝膠電泳法，研究了八種含脯氨酸的二肽在金屬離子輔助下對(duì)pUC19質(zhì)粒DNA的切割活性，從Cu2+，Zn2+，Co2+，Mg2+，Ca2+五中金屬離子中篩選出了最佳輔助切割金屬離子Co2+;又依次對(duì)最佳切割pH、

3、最佳切割濃度及最佳切割時(shí)間進(jìn)行了考察。研究表明，不同二肽在金屬離子輔助作用下的最佳切割pH為6.8或7.0，最佳切割濃度為0.6mM/L，最佳切割時(shí)間48h。最后以cyclo(L-Pro-L-Phe)和L-Pro-L-Phe為例，研究了金屬離子輔助下二肽對(duì)DNA的切割機(jī)理，結(jié)果表明為水解切割機(jī)理。
　　其次，運(yùn)用UV技術(shù)研究了側(cè)鏈帶有共軛基團(tuán)的含脯氨酸的二肽與金屬離子過(guò)程中的紫外變化情況間的相互作用。研究表明，隨著金屬離子的不斷加

4、入，二肽的紫外吸收發(fā)生有規(guī)律紅移，并且吸光度也不斷增加。據(jù)此，求得不同二肽與金屬離子之間相互作用的結(jié)合常數(shù)。從結(jié)合常數(shù)大小可知，金屬Co2+與二肽相互作用的結(jié)合常數(shù)普遍較大，故認(rèn)為金屬Co2+與二肽結(jié)合能力最強(qiáng)。最后又以Co2+-二肽-ctDNA體系為研究對(duì)象，研究金屬離子輔助下二肽與DNA之間的作用方式。結(jié)果表明，二肽與DNA之間以靜電方式發(fā)生作用。
　　最后，運(yùn)用NMR滴定的方法，研究了部分極性二肽（均為L(zhǎng)L構(gòu)型）與金屬Li+