改變11β-HSD1的表達(dá)水平對(duì)細(xì)胞炎性損傷的影響.pdf

1、目的:ARDS作為威脅人類生命的一個(gè)常見危重癥，對(duì)人類的健康造成了威脅。半個(gè)世紀(jì)以來，ARDS一直備受各國政府、醫(yī)學(xué)界的高度關(guān)注。盡管呼吸機(jī)可有控制ARDS的進(jìn)展，但最快和最容易實(shí)現(xiàn)的治療方法是藥物治療，糖皮質(zhì)激素(glucocorticoid，GC)用于治療急性呼吸窘迫綜合癥(acute respiratory distress syndrome，ARDS)已有多年歷史，理論上GC的抗炎等作用對(duì)ARDS有效，但部分病人對(duì)GC療效不佳。

2、臨床研究中對(duì)GC褒貶不一，至今未有一致結(jié)論。長期以來認(rèn)為糖皮質(zhì)激素受體(glucocorticoid receptor,GR)的減少是ARDS時(shí)機(jī)體產(chǎn)生GC抵抗的主要機(jī)制。盡管有關(guān)GR的研究已較深入和充分，但目前尚未解決ARDS的GC抵抗問題。僅從受體水平研究存在局限，需要開拓新的研究方向，尋求突破。在GC抵抗中GC似較GR具有更為重要，我們推斷細(xì)胞內(nèi)GC的相對(duì)或絕對(duì)不足是ARDS對(duì)GC療效不佳的一個(gè)重要原因。11β-羥基類固醇脫氫酶(

3、11β-hydroxysteroid dehydrogenase，11β-HSD)是受體前調(diào)節(jié)糖皮質(zhì)激素作用的關(guān)鍵酶。分為11-βHSD1和11-βHSD2兩種亞型。11β-羥基類固醇脫氫酶1(11β-hydroxysteroid dehydrogenase type1，11β-HSD1)催化無活性的可的松到有活性的皮質(zhì)醇。本課題為深入研究GC的受體前調(diào)節(jié)，驗(yàn)證11β-HSD1在炎性損傷細(xì)胞中的作用，從而尋找GC抵抗的可能原因。

4、　　 方法:本實(shí)驗(yàn)先在臨床中回顧性研究近4年住我科重癥肺炎所致ARDS病人的治療中用GC組及非GC組效果相關(guān)指標(biāo)比較，包括患者轉(zhuǎn)歸、呼吸機(jī)使用時(shí)間、肺部感染嚴(yán)重程度指數(shù)、肺部陰影吸收指數(shù)，氧合指數(shù)PaO2/FiO2，休克的相關(guān)監(jiān)測(cè)指標(biāo)等。對(duì)GC對(duì)ARDS的臨床治療效果進(jìn)行簡單評(píng)估。然后在體外通過LPS分別刺激人體肺腺癌上皮細(xì)胞系(A549)、人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞株(ECV304)、原代人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC)，根據(jù)測(cè)定不同時(shí)

5、間、不同濃度脂多糖(lipopolysaccharide，LPS)刺激細(xì)胞后IL-6分泌量，從而篩選合理性損傷模型，并對(duì)目的細(xì)胞進(jìn)行鑒定。然后從基因分子水平分別構(gòu)建pcDNA3.1myc/his-11β-HSD1的真核表達(dá)載體及從公司合成11β-HSD1-siRNA(Small interfering RNA，siRNA)，并分別轉(zhuǎn)染體外建立的炎性損傷模型，通過檢測(cè)其蛋白表達(dá)水平的變化檢測(cè)載體是否轉(zhuǎn)染成功，并檢測(cè)培養(yǎng)上清中白介素-6(i

6、nterleukin-6，IL-6)水平的變化，來驗(yàn)證11β-HSD1在炎癥調(diào)控中的作用，從而探討GC治療不敏感的可能原因。
　　 結(jié)果:1.GC能改善部分ARDS患者的氧合狀況，但部分患者對(duì)GC治療效果不明顯。2、LPS濃度1ug/ml，刺激人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞48h為內(nèi)皮細(xì)胞炎性損傷模型。3、成功構(gòu)建了11β-HSD1-pcDNA3.1myc/his真核表達(dá)載體，并在HUVEC細(xì)胞中成功表達(dá)。成功篩選到了干涉11β-HSD1