半月板碎塊法移植修復半月板無血運區(qū)損傷的實驗研究.pdf

1、目的:1.探討皮下埋植不同大小半月板碎塊組織的生物學活性及其差異;2.觀察幼年及成年動物半月板碎塊體外培養(yǎng)與體內移植修復半月板無血運區(qū)損傷的效果。
　　方法:1.取成年家兔雙膝內側半月板，去除周圍1/3，將其中內2/3切成不同大小的碎塊:0.5mm×0.5mm×0.5mm（A組）;1.0mm×1.0mm×1.0mm(B組);2.0mm×2.0mm×2.0mm(C組),筋膜包裹后埋植于自體大腿外側皮下。分別于皮下埋植1、2、3周時取

2、出標本，行活細胞/死細胞熒光染色激光共聚焦顯微鏡觀察細胞遷移;制作石蠟切片，HE染色觀察細胞遷移;皮下埋植3周時，切片行番紅O/固綠染色，Ⅰ型膠原、Ⅱ型膠原及PCNA免疫組化。
　　2.獲取成年豬內側半月板，于其中內2/3用環(huán)鋸切取直徑8mm，厚3mm圓柱體標本，于每份標本中央用環(huán)鋸切取直徑4mm，厚3mm中央圓柱體，將取出的中央圓柱體水平等分為上、中、下三份，每份厚1mm。將其中份取出，分別用不同的半月板組織移植替代:幼年豬半月

3、板碎塊（約0.5mm×0.5mm×0.5mm， A組）;幼年豬半月板整塊（B組）;成年豬半月板碎塊（取出的中份切成約0.5mm×0.5mm×0.5mm大小后回植，C組）;成年豬半月板整塊（取出的中央圓柱體中份整塊回植，D組）。移植物與中央圓柱體上、下份組成“三明治”結構后回植。標本進行體外培養(yǎng)，分別于培養(yǎng)2、4、6周時取出標本，激光共聚焦顯微鏡觀察界面細胞聚集;制作石蠟切片，HE染色，分別觀察移植物周圍界面、碎塊間界面修復情況;培養(yǎng)6周

4、時，切片行番紅O/固綠染色，天狼星紅染色偏光顯微鏡觀察，Ⅰ型膠原、Ⅱ型膠原免疫組化，分析周圍界面修復組織成分。
　　3.造成年家兔右膝內側半月板體部無血運區(qū)損傷模型，損傷處分別移植不同的半月板組織:新鮮幼年兔半月板碎塊（約0.5mm×0.5mm×0.5mm，A組）;新鮮幼年兔半月板整塊（B組）;新鮮成年兔半月板碎塊（約0.5mm×0.5mm×0.5mm，C組）;新鮮成年兔半月板整塊（D組）。分別于術后第4周、8周，取出右膝內側半月

5、板標本行大體觀察及組織學觀察。
　　結果:1.兔半月板碎塊組織皮下埋植1、2、3周，活細胞/死細胞熒光染色激光共聚焦顯微鏡觀察結果顯示半月板纖維軟骨細胞向碎塊表面遷移，在任意時間點A組至C組均逐漸減弱(P＜0.05)，與碎塊大小呈負相關性(P＜0.05);各組隨皮下埋植時間增加細胞遷移均逐漸增強(P＜0.05)。HE染色觀察證實細胞向碎塊表面遷移。皮下埋植3周時，Ⅰ型膠原、Ⅱ型膠原免疫組化A組至C組均逐漸減弱(P＜0.05)，與碎

6、塊大小呈負相關性(P＜0.05); PCNA免疫組化A組強于B組，B組強于C組，A組與C組比較有統(tǒng)計學差異(P＜0.05);番紅O染色各組無顯著性差異(P＞0.05)。
　　2.成年豬半月板標本體外培養(yǎng)2、4、6周，激光共聚焦顯微鏡觀察結果顯示移植物周圍界面有細胞聚集，在任意時間點，A組至D組細胞聚集均逐漸減弱(P＜0.05);隨培養(yǎng)時間增加，各組周圍界面細胞聚集均逐漸增加(P＜0.05)。HE染色:移植物周圍界面修復在任意時間點

7、A組至D組均逐漸減弱(P＜0.05)，碎塊間界面A組均強于C組(P＜0.05);隨培養(yǎng)時間增加，各組移植物周圍界面及A、C組碎塊間界面修復均逐漸增強(P＜0.05)。體外培養(yǎng)6周時，A、B、C三組移植物周圍界面均有修復組織，番紅O/固綠染色、天狼星紅染色/偏光顯微鏡觀察、免疫組化均顯示修復組織中Ⅰ型膠原、Ⅱ性膠原共存。
　　3.兔體內實驗中標本大體觀察半定量評分在各時間點A組至D組均逐漸減少(P＜0.05);各組4周至8周界面愈合