雄蠶蛾蛋白活性肽的制備及其抗疲勞作用研究.pdf

1、雄蠶蛾是滋補(bǔ)強(qiáng)身的佳品，其抗疲勞功效也在臨床實(shí)踐中得到證實(shí)，但目前的研究和產(chǎn)品開發(fā)多集中于雄性激素、蛻皮激素等活性成分。雄蠶蛾中蛋白含量高達(dá)40％以上，可通過酶解技術(shù)挖掘其功能因子，拓寬其利用領(lǐng)域。本論文以雄蠶蛾為原料，利用酶解技術(shù)制備雄蠶蛾多肽，通過超濾進(jìn)行分級分離，系統(tǒng)研究了其體外抗氧化活性及穩(wěn)定性，并通過動(dòng)物實(shí)驗(yàn)評價(jià)了其抗疲勞作用。本研究有助于開發(fā)天然、安全、高效的抗疲勞食品基料，同時(shí)為科學(xué)全面地利用雄蠶蛾資源提供了依據(jù)。

2、　　1、建立了高效的酶解工藝。實(shí)驗(yàn)以蠶蛾粉為原料，對pH、溫度、時(shí)間、酶配比、料液比及酶用量等進(jìn)行單因素實(shí)驗(yàn)，控制雄蠶蛾蛋白酶解的水解度和肽得率雙指標(biāo)，得到的最佳條件為pH10，溫度為50℃，時(shí)間120min，底物濃度7.5％，雙酶(Alcalase堿性蛋白酶、丹尼斯克堿性蛋白酶)復(fù)配比例為1∶2，酶活為5000U/g。隨后采用Box-Benhnken中心組合實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)法對酶解條件進(jìn)行優(yōu)化，建立pH、溫度、時(shí)間、料液比等四因素的酶解效率回

3、歸模型。經(jīng)過Design-Expert軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行回歸分析并結(jié)合試驗(yàn)驗(yàn)證的結(jié)果，確定的最佳酶解條件為:pH9.5、溫度55℃、時(shí)間130min、底物濃度7.0％。在此工藝條件下驗(yàn)證結(jié)果為水解度27.32％，肽得率50.43％，綜合值40.47％。建立的回歸模型可以較好的預(yù)測酶解效果，對實(shí)際生產(chǎn)應(yīng)用有一定指導(dǎo)意義。
　　2、對雄蠶蛾多肽進(jìn)行分離分級及抗氧化活性研究。確定了雄蠶蛾蛋白質(zhì)和水解物的分子量分布情況，將透析后的雄蠶蛾酶解物

4、進(jìn)行超濾分級，得到五個(gè)組分，分別為MSH-Ⅰ(MW＞30kDa), MSH-Ⅱ(10-30kDa), MSH-Ⅲ(5-10kDa), MSH-Ⅳ(3-5kDa)和MSH-Ⅴ(＜3kDa)，對超濾組分的氨基酸組成進(jìn)行了分析和抗氧化活性體外測定，發(fā)現(xiàn)小于3KDa的組分抗氧化能力最強(qiáng)，相應(yīng)ORAC和DPPH的Trolox當(dāng)量值分別為1950μmol/g和275μmol/g。
　　3、系統(tǒng)研究了雄蠶蛾多肽的穩(wěn)定性。發(fā)現(xiàn)雄蠶蛾多肽在NaCl

5、濃度低于4％，25-60℃及中性pH的加工貯藏條件下，抗氧化活性能保持較高水平，而隨著光照時(shí)間的延長，其抗氧化活性有所減弱，宜采用避光保存。經(jīng)模擬胃腸消化后，雄蠶蛾多肽仍具有較高的抗氧化活性，說明其抗消化穩(wěn)定性較好，具有在人體內(nèi)發(fā)揮功效的潛力。
　　4、研究雄蠶蛾多肽對小鼠抗疲勞作用及機(jī)理。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)將小鼠分為五組，分別為空白對照組，實(shí)驗(yàn)對照組，低劑量組，中劑量組和高劑量組，飼喂時(shí)間為期一月，然后對各實(shí)驗(yàn)組進(jìn)行睡眠剝奪處理，隨后進(jìn)行