納米硒的制備工藝優(yōu)化及其抗氧化性能的初探.pdf

1、本課題用水溶性的殼聚糖作為模板制備納米硒，采用粒徑儀檢測(cè)納米硒的粒徑分布，應(yīng)用TEM、XRD分別對(duì)納米硒形貌、晶型進(jìn)行表征，并通過紅外光譜、Zeta電位儀系統(tǒng)研究納米殼聚糖硒穩(wěn)定性，系統(tǒng)探討了殼聚糖濃度、透析袋處理、保存溫度等因素對(duì)納米硒粒徑、電荷和穩(wěn)定性的影響，確定了制備納米硒溶液適宜的殼聚糖濃度和保存措施。在此基礎(chǔ)上應(yīng)用制備得到的納米硒培養(yǎng)BRL細(xì)胞，研究了低營(yíng)養(yǎng)劑量和營(yíng)養(yǎng)劑量納米硒對(duì)BRL大鼠肝細(xì)胞的抗氧化性能的影響，進(jìn)而篩選出最

2、優(yōu)添加劑量。
　　1.納米硒制備工藝優(yōu)化:
　　在Vc還原亞硒酸鈉（摩爾比為4∶1）的體系中，以殼聚糖為模板制備粒徑均一、穩(wěn)定的無(wú)定形硒納米粒子(CS-SeNPs)。采用粒徑儀觀測(cè)納米硒的粒徑分布及其穩(wěn)定性，應(yīng)用TEM、XRD分別對(duì)納米硒形貌、晶型進(jìn)行表征，并通過紅外光譜、Zeta電位儀研究納米殼聚糖硒穩(wěn)定性。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:
　　(1)納米殼聚糖硒的制備:殼聚糖可以有效地將納米硒的粒徑調(diào)整到100nm以內(nèi)，當(dāng)殼聚糖濃度

3、為0.12％時(shí)納米硒的粒徑均一，分散性好，且粒徑≤70nm;氧化還原反應(yīng)制得的納米硒混合溶液用透析袋(＜3500)處理48h后，由于除去了其中未參加反應(yīng)的粒子，如殼聚糖，抗壞血酸等，以防其中和殼聚糖表面電荷，使納米粒子聚集，明顯改善了納米硒的分散性。
　　(2)納米硒的表征:殼聚糖可調(diào)節(jié)納米硒的粒徑，當(dāng)殼聚糖濃度為0.12％時(shí)，可制備得到平均粒徑為68.04nm，表面電荷為+19.9mv，PDI=0.154的納米硒;硒是以物理結(jié)合

4、的方式附著在殼聚糖表面，以此形成穩(wěn)定的無(wú)定型納米結(jié)構(gòu)。
　　(3)納米硒的穩(wěn)定性研究:4℃冰箱保存的納米硒較常溫保存條件下粒徑和表面電荷均更加穩(wěn)定。由于納米粒子有快速團(tuán)聚的特點(diǎn)，將其進(jìn)行透析處理，放置于4攝氏度的冰箱中可保存至少6個(gè)月。
　　2.不同濃度的CS-SeNPs對(duì)大鼠肝細(xì)胞抗氧化性能的影響
　　優(yōu)選粒徑均一，穩(wěn)定性好的納米硒(粒徑70nm左右，表面電荷為+19.9mV)，以0μM，0.04μM，0.08μM，

5、0.16μM，0.4μM，1μM濃度的CS-SeNPs對(duì)BRL細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:
　　(1)采用MTT法研究CS-SeNPs對(duì)細(xì)胞活性的影響，結(jié)果顯示0.04μM，0.08μM，0.16μM，0.4μM濃度的CS-SeNPs會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞的存活率升高，其中0.16μM濃度的CS-SeNPs組較對(duì)照組差異顯著，而1μM濃度的CS-SeNPs使細(xì)胞活性顯著降低。
　　(2)研究不同濃度CS-SeNPs對(duì)細(xì)胞內(nèi)GPX活性影響

6、結(jié)果顯示，添加0.04μM，0.08μM，0.16μM，0.4μM，1μM濃度CS-SeNPs能顯著增強(qiáng)大鼠肝細(xì)胞GPX活性;處理組大鼠肝細(xì)胞內(nèi)GSH含量均較空白對(duì)照組有降低，除0.4μM濃度的SeNPs處理組外，其他組均差異顯著;0.16μM，0.4μM，1μM濃度CS-SeNPs處理組大鼠肝細(xì)胞內(nèi)的GSSG含量較對(duì)照組有顯著升高;納米硒處理組的GSH/GSSG值均低于對(duì)照組，1μM濃度CS-SeNPs較對(duì)照組顯著降低了GSH/GSS

7、G值。
　　(3)研究不同濃度CS-SeNPs對(duì)細(xì)胞內(nèi)抗氧化活性影響結(jié)果顯示，0.16，0.4，1μM濃度的CS-SeNPs使細(xì)胞內(nèi)MDA顯著下降;0.04，0.08，0.16，0.4，1μM濃度CS-SeNPs使細(xì)胞內(nèi)CAT的活性顯著升高;細(xì)胞內(nèi)T-AOC的檢測(cè)結(jié)果顯示，0.04，0.08，0.16，0.4，1μM濃度CS-SeNPs處理組的T-AOC比對(duì)照組分別提高了3.8倍、1.38倍、3.2倍、5.8倍和3.56倍，差異顯

8、著。0.04μM濃度的CS-SeNPs使細(xì)胞內(nèi)SOD酶的活性顯著升高，其他組SOD酶活性均顯著下降。
　　綜合上述研究結(jié)果得出:殼聚糖添加濃度為0.12％時(shí)，納米殼聚糖硒的粒徑(68.04nm)最小，納米硒溶液用透析袋處理后，4℃保存能提高溶液體系的穩(wěn)定性;小于1μM的CS-SeNPs對(duì)大鼠肝細(xì)胞的活性有促進(jìn)作用，添加CS-SeNPs對(duì)大鼠肝細(xì)胞的GPX活性及抗氧化性均有促進(jìn)作用，且發(fā)現(xiàn)高峰平臺(tái)期的濃度處于0.08μM-0.4μM