負(fù)載紫草素的溫敏被動(dòng)靶向納米膠束的制備及抗乳腺癌作用研究.pdf

1、研究目的：
　　乳腺癌已成為全球女性發(fā)病率最高的惡性腫瘤，占女性新發(fā)癌癥的29％，是20-59歲女性最大的癌癥死因，嚴(yán)重地影響了女性的健康。紫草素（Shikonin）為中藥紫草的主要有效成分。體外實(shí)驗(yàn)已證實(shí)，紫草素具有較強(qiáng)的抗乳腺癌作用。然而，紫草素難溶于水，且體內(nèi)分布廣泛。有研究報(bào)道，小鼠靜脈注射3H標(biāo)記的紫草素后，體內(nèi)分布廣泛，含量從高到低依次為膽汁、肝＞肺、脾、腎、心、皮膚＞睪丸、肌肉、腦。為提高紫草素對(duì)乳腺癌組織的靶向性，

2、本研究合成了具有溫度敏感性的嵌段共聚物(BlockCopolymer Micelles，BCMs)，其能在水中自組裝成納米膠束，負(fù)載紫草素載。同時(shí)，在腫瘤微環(huán)境相對(duì)于正常組織較高溫度的條件下，增強(qiáng)溫敏納米膠束(ThermosensitiveNanomicelle，TN)的細(xì)胞內(nèi)吞，實(shí)現(xiàn)溫敏被動(dòng)靶向。最后，對(duì)負(fù)載紫草素的溫敏納米膠束(Shikonin-loaded Thermosensitive Nanomicelle，STN)的生物相容

3、性及體內(nèi)外抗腫瘤作用進(jìn)行評(píng)價(jià)。
　　研究方法：
　　本研究首先要合成具有溫度敏感性的PID118-b-PLA39，使其體積相轉(zhuǎn)變溫度(VolumePhase Transition Temperature，VPTT)控制在40℃左右，具有體內(nèi)外溫敏被動(dòng)靶向功能。通過在水中透析自組裝，調(diào)節(jié)PID118-b-PLA39在水中的結(jié)構(gòu)形態(tài)，制備溫敏納米膠束。利用膠束PLA疏水內(nèi)核紫草素的水溶性，進(jìn)一步形成STN。接著，利用動(dòng)態(tài)/靜態(tài)激

4、光光散射儀(Dynamic/Static Light Scattering Instrument，DLS)和透射電子顯微鏡（Transmission Electron Microscope，TEM）對(duì)所制備的溫敏納米膠束的性能和結(jié)構(gòu)進(jìn)行測(cè)定。在體外實(shí)驗(yàn)中，首先通過測(cè)定溫敏納米膠束與BSA的結(jié)合后的粒徑分布，測(cè)定其血清穩(wěn)定性。其次，利用倒置熒光顯微鏡和LSCM觀察負(fù)載FITC的溫敏納米膠束(FITC-loaded Thermosensit

5、ive Nanomicelle，F(xiàn)TN)被乳腺癌MCF-7細(xì)胞內(nèi)吞和富集的程度。通過CCK-8實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)溫敏納米膠束細(xì)胞毒性，以及負(fù)載紫草素后的細(xì)胞殺傷效果。用流式細(xì)胞儀檢測(cè)STN對(duì)乳腺癌MCF-7細(xì)胞的凋亡影響。在體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中，通過構(gòu)建乳腺癌荷瘤裸鼠模型，利用小動(dòng)物活體成像儀評(píng)價(jià)FTN在荷瘤BALB/C裸鼠體內(nèi)的分布。構(gòu)建乳癌荷瘤小鼠，觀察尾靜脈注射STN后，裸鼠體重、腫瘤的大小及生存期的不同。設(shè)定組別為:PBS組（Control）、游離

6、紫草素組(Free Shikonin, FS)、STN組(37℃)、STN組(40℃)。
　　研究結(jié)果：
　　我們成功合成了具有溫度敏感性的溫敏納米膠束。體外穩(wěn)定性試驗(yàn)表明，其在血清中的穩(wěn)定性良好。倒置熒光顯微鏡和LSCM結(jié)果表明，F(xiàn)TN在40℃的情況下被乳腺癌MCF-7細(xì)胞內(nèi)吞并富集的程度明顯強(qiáng)于37℃組和游離紫草素組。CCK-8實(shí)驗(yàn)表明，溫敏納米膠束生物毒性較低，但負(fù)載紫草素后則能有效殺傷乳腺癌MCF-7細(xì)胞，40℃組明

7、顯37℃組。流式細(xì)胞儀檢測(cè)結(jié)果表明，STN在40℃的情況下，能有效誘導(dǎo)乳腺癌MCF-7細(xì)胞的凋亡。體內(nèi)分布結(jié)果發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)TN在靜脈給藥進(jìn)入裸鼠體內(nèi)24 h后，可以從小鼠的實(shí)體瘤中觀察到非常明顯的FTN聚集。體內(nèi)抑瘤實(shí)驗(yàn)表明，STN治療后，乳腺癌實(shí)體瘤的生長(zhǎng)得到明顯的抑制，其增長(zhǎng)速度比對(duì)照組明顯減慢(PBS=3859 mm3，F(xiàn)S=2372 mm3, STN(37℃)=2278 mm3, STN(40℃)=1235 mm3; STN(40℃