三氮嗪后處理在大鼠心肌線粒體比較蛋白質(zhì)組學(xué)的研究.pdf

1、目的:
　　 建立大鼠心肌缺血再灌注損傷模型,觀察二氮嗪后處理對缺血再灌注損傷大鼠心臟功能的影響,以及二氮嗪后處理對線粒體內(nèi)蛋白質(zhì)表達(dá)的影響。
　　 方法:
　　 建立Langendorff大鼠離體心臟缺血再灌注損傷模型。將24只雄性SD大鼠隨機(jī)分為空白組(Nor)、缺血再灌注損傷組(Con)、二氮嗪后處理組(DZ)、5-羥葵酸拮抗二氮嗪后處理組(5HD-DZ),每組6只。
　　 各組灌注方案:
　

2、　 Nor組:持續(xù)灌注K-H液120min,無缺血再灌注損傷。Con組、DZ組、5HD-DZ組缺血前先灌注Kerbs-Henseleit緩沖液(K-H液)平衡20min,灌注4℃ST.Thomas停跳液,使全心缺血40min后,此三組按以下方案灌注:①Con組:灌注K-H液60min;②DZ組:灌注K-H液前給予50μmol/L二氮嗪5min,繼之K-H液55min;③5HD-DZ組:序貫灌注100μmol/L5-羥葵酸5min、50

3、μmol/L二氮嗪5min、K-H液50min.
　　 觀察各組平衡末及灌注末心功能,于灌注末取左心室組織,采用差速離心法和Nycodenz密度梯度離心法分離大鼠心肌線粒體.采用2D-DIGE和MALDI-TOF-MS技術(shù),檢測鑒定各組心肌線粒體的蛋白質(zhì)表達(dá)情況,蛋白表達(dá)的差異在1.5倍以上者為有意義。
　　 結(jié)果:
　　 (1)利用Nycodenz密度梯度離心法提純的線粒體純度高;
　　 (2)再灌注前

4、給予二氮嗪處理(DZ組)的缺血心臟,心功能明顯好于Con組和5HD-DZ組(P＜0.05),Nor組心功能優(yōu)于DZ組(P＜0.05);
　　 (3)經(jīng)2D-DIGE和MALDI-TOF-MS鑒定,與Nor組比較,Con組、DZ組、5HD-DZ組丙酮酸脫氫酶E1α亞基(PDHAD、短鏈/支鏈脂酰輔酶A脫氫酶(ACADSB)、NADH脫氫酶I10α亞基(NDUFA10)和rCG55630四個蛋白在缺血再灌注末的表達(dá)量增加;
　

5、　 (4)再灌注末,DZ組NDUFA10和rCG55630的升高程度低于Con組和5HD-DZ組;再灌注末,PDHA1和ACADSB在Con組,DZ組和5HD-DZ組中的表達(dá)無明顯差異.
　　 結(jié)論:
　　 (1)PDHA1、ACADSB、NDUFA10和rCG55630在缺血/再灌注早期表達(dá)上調(diào);
　　 (2)二氮嗪后處理可抑制心肌缺血/再灌注早期NDUFA10和rCG55630表達(dá)的增加;
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