SS31減輕大鼠肝臟缺血再灌注損傷的試驗(yàn)研究.pdf

1、第一部分測(cè)試保存液中添加SS31的穩(wěn)定性
　　 目的：獲得保存液中添加SS31多肽穩(wěn)定性的數(shù)據(jù)支持 藥理研究材料和方法：在UW液中添加不同濃度(0，1．052μg/ml，10．52μg/ml，52．58μg/ml，105．2μg/ml)的SS31，4℃不同環(huán)境下(避光或光照)保存0，1，2，3和7天，保存終點(diǎn)觀察保存液顏色、性狀等改變，并檢測(cè)保存液中SS31的成分結(jié)構(gòu)是否發(fā)生改變。每種保存液通過(guò)0．22微米過(guò)濾膜過(guò)濾后分裝在超潔

2、凈工作臺(tái)的玻璃容器中按計(jì)劃保存，然后在測(cè)試時(shí)間通過(guò)HPLC—UV進(jìn)行分析。保存液中添加SS31穩(wěn)定性通過(guò)外觀和多肽濃度來(lái)評(píng)估。UW液色譜有許多峰值而HPLC純度不能精確計(jì)算，因此HPLC純度不能作為評(píng)估參數(shù)。
　　 結(jié)果：所有測(cè)試的保存液的外觀沒(méi)有改變。保存7天后UW色譜無(wú)任何改變。
　　 結(jié)論：SS31基本上可以在UW液里穩(wěn)定保存7天。尤其是在多肽濃度>100μg/ml。不推薦低濃度(<10μg/ml)保存。SS—31

3、在室溫下穩(wěn)定，光照和無(wú)菌過(guò)濾無(wú)明顯影響。但是建議在4℃無(wú)菌濾過(guò)貯存。
　　 第二部分探討保存液中添加SS31后對(duì)大鼠肝臟冷缺血再灌注損傷的保護(hù)效果
　　 目的：探討UW保存液中添加SS31后對(duì)肝臟冷缺血再灌注損傷的保護(hù)效果。
　　 材料和方法：大鼠肝臟原位灌注切取后，一組立即通過(guò)離體灌注系統(tǒng)在37℃條件下以20ml/min的流量經(jīng)門靜脈循環(huán)灌注Krebs—Henseleit液60min，另外二組在UW液和UW+S

4、S31液中4℃分別保存24h，冷保存后通過(guò)離體再灌注系統(tǒng)，在以同樣條件灌注60min，通過(guò)膽汁分泌、灌注流量和生化檢測(cè)觀察灌注液中ALT、AST、LDH的改變，灌注結(jié)束后通過(guò)光鏡、電鏡觀察肝臟組織病理學(xué)改變，探討UW保存液中添加SS31后對(duì)肝臟冷缺血再灌注損傷的保護(hù)效果。
　　 結(jié)果：在UW液中冷保存24h后肝臟膽汁分泌量減少，而UW+SS31液組膽汁分泌量明顯增加。UW液中添加SS31可以降低血管阻力，增加灌注流量。對(duì)照組酶學(xué)

5、指標(biāo)明顯升高，UW+SS31液組灌出液中的酶學(xué)指標(biāo)相對(duì)UW液組中有一定程度的升高。病理結(jié)果顯示，UW+SS31組病理?yè)p傷要相對(duì)UW組略高，主要是肝細(xì)胞索解離、肝細(xì)胞腫脹胞質(zhì)淡染、肝細(xì)胞空泡化這三項(xiàng)指標(biāo)，UW+SS31組要稍差于UW組。
　　 結(jié)論：從宏觀上看，SS31可顯著保護(hù)肝臟的整體功能，并對(duì)肝竇內(nèi)皮細(xì)胞有一定的保護(hù)作用，但同時(shí)從超微結(jié)構(gòu)看SS31可能會(huì)在某種程度上造成肝細(xì)胞的損傷，引起肝細(xì)胞腫脹，這有待于進(jìn)一步研究證實(shí)。<

6、br>　　 第三部分探討SS31在保存液中的最佳作用濃度
　　 目的：探討SS31在保存液中的最佳作用濃度
　　 材料和方法：大鼠肝臟原位灌注切取后，在1mg/L、0．1mg/L和0．01mg/L，的SS31+UW液中4℃分別保存24h，冷保存后通過(guò)離體再灌注系統(tǒng)，冷保存后通過(guò)離體再灌注系統(tǒng)，在以同樣條件灌注40min，通過(guò)生化檢測(cè)觀察灌注液中ALT、AST、LDH的改變，灌注結(jié)束后通過(guò)光鏡、電鏡觀察肝臟組織病理學(xué)改變

7、，探討UW保存液中添加SS31后對(duì)肝臟冷缺血再灌注損傷保護(hù)中的最佳作用濃度。
　　 結(jié)果：隨著SS31濃度的升高，膽汁分泌量逐漸增加，提示SS31在肝功能保護(hù)方面是劑量依賴性的，0．01 mg/L，0．1 mg/L and1 mg/L UW/SS31產(chǎn)生的膽汁分別為0．078±0．056，0．127±0．111 and0．148±0．041 ml/min·g．1mg/L濃度的SS31作用效果最明顯。但同時(shí)需注意的是，隨著SS—3

8、1濃度的升高，ALT、AST值逐漸升高，表明其對(duì)肝細(xì)胞的損傷逐漸加重，提示SS—31也有劑量依賴性的肝細(xì)胞毒性，同時(shí)由于LDH對(duì)肝細(xì)胞損傷的特異性較差，低濃度時(shí)SS31升高LDH的作用并不明顯。在肝竇內(nèi)皮細(xì)胞的保護(hù)方面，不同濃度SS31均有保護(hù)作用，其中低濃度(0．01mg/L)的SS31的保護(hù)作用最明顯，較高濃度(0．1mg/L和1mg/L)的SS31由于引起不同程度肝組織腫脹，壓迫肝竇，造成了灌注后期肝內(nèi)血管阻力的升高。