老年髖部骨折患者骨髓間充質干細胞的單細胞轉錄組基因測序亞群分析.pdf

1、研究背景:
　　髖部骨折是老年人最常見損傷之一，其預后效果差，老年髖部骨折患者預后不良與術后并發(fā)癥發(fā)生率高有關，骨折后1年內致殘率超過50％，死亡率高達36％。目前的治療方案雖然強調早期手術固定以及功能康復鍛煉，但致死率、致殘率仍高居不下。近些年發(fā)現(xiàn)，老年髖部骨折后出現(xiàn)的高致殘率、高死亡率與骨折后機體出現(xiàn)的免疫炎癥紊亂有著密切的關系！因此，在外科治療的同時，糾正老年髖部骨折患者機體內出現(xiàn)的免疫功能紊亂狀態(tài)，將會是解決這一問題的關鍵

2、。而骨髓間充質干細胞具有很強的抗炎作用、組織修復及免疫調節(jié)功能，在許多與免疫炎癥相關疾病的治療過程中已取得了很大成功，但是對老年患者創(chuàng)傷后免疫功能調節(jié)目前尚無相關報道。骨髓間充質干細胞是一類高度異質性的細胞群，而以往對異質性的細胞群體的認識都是停留在群體水平上面。因此，更加系統(tǒng)而全面韻認識和探索各亞群之間的構成，找到真正有意義的亞群/亞群比例（與免疫調節(jié)有關系）是十分必要的。近年來，單細胞轉錄組測序技術的發(fā)展為異質性細胞群體在單細胞水平

3、方面的研究上奠定了重要基礎。
　　研究目的:
　　通過單細胞轉錄組測序技術分析老年髖部骨折患者骨髓間充質干細胞的異質性，找出不同的亞群，并且分析各個群的功能;對于每個細胞亞群，將該亞群與其他所有亞群做差異分析比較，獲得每個亞群差異高表達的基因，作為亞群的特征基因;在每群特異性表達的基因里通過數(shù)據(jù)庫分析找到特異性表達的基因與哪些疾病相關;找到與免疫調節(jié)有關的亞群/亞群比例，為后期通過干細胞治療降低老年髖部骨折患者術后并發(fā)癥打下

4、堅實的基礎。
　　研究方法:
　　1、選取一例股骨粗隆間骨折需行手術治療的患者，在術中擴髓過程中用注射器抽取約10ml骨髓，置于無菌袋中立即送入實驗室。
　　2、將骨髓間充質干細胞混合液進行分離、培養(yǎng)，待細胞生長至80％時進行融合，隨后進行傳代培養(yǎng)，獲取第二代MSCs。
　　3、采用流式細胞熒光分選技術對獲得的第二代MSCs進行鑒定，并進行成骨、成軟骨、成脂肪方向分化，確定為骨髓間充質干細胞。
　　4、對第

5、二代MSCs進行細胞消化，使細胞量達到1000個/ul，體積100ul，并溶于PBS中，置于無菌袋中送至北京博奧晶典生物技術有限公司進行單細胞基因測序及亞群分析。
　　研究結果:
　　擴髓過程中抽取的老年患者骨髓按照一定方法可培養(yǎng)出來骨髓間充質干細胞;培養(yǎng)出來的骨髓間充質干細胞在第二代時細胞形態(tài)、貼壁性最好;第三代時即出現(xiàn)增殖不明顯，貼壁性不好;第四代時細胞已不再增殖;培養(yǎng)出來的骨髓間充質干細胞表達為CD90(+)、CD10