從IRS-1-PI3K-Akt信號(hào)通路研究齊墩果酸改善高果糖所致大鼠脂肪組織胰島素抵抗的機(jī)制.pdf

1、目的:研究三萜系化合物齊墩果酸改善高果糖所致大鼠脂肪組織胰島素抵抗的分子機(jī)制
　　方法:24只SPF級(jí)SD大鼠隨機(jī)分為4組(n=6):(1)空白對(duì)照組:自由飲水;(2)果糖對(duì)照組:給予10％果糖水(w/v,每天配制);(3)OA低濃度藥物組:果糖水+OA提取物5 mg/kg;(4) OA高濃度藥物組:果糖水+ OA提取物25 mg/kg。觀察大鼠的一般情況與附睪白色脂肪的組織病理學(xué)改變;檢測(cè)血漿生化指標(biāo)如TC、TG、NEFA、血糖

2、等;ELISA法檢測(cè)大鼠血漿胰島素濃度，并計(jì)算HOMA-IR、adipo-IR指標(biāo);Real-Time PCR檢測(cè)脂肪組織IR、IRS-1、IRS-2、PI3K、Akt、TNF-α、PPAR-γ、adiponectin、SREBP-1c、FAS、ACC-1、SCD-1的表達(dá)。Westernblot分析全蛋白、漿蛋白及核蛋白IRS-1、pIRS-1、Akt、pAkt、Akt/pAkt、IRS-2、PI3K的表達(dá)。
　　結(jié)果:

3、　　1.WAT形態(tài)學(xué)改變:果糖對(duì)照組附睪WAT重量、附睪WAT重量占體重的百分比、脂肪細(xì)胞的體積均增加，與之相反，脂肪細(xì)胞的數(shù)量減少（每個(gè)視野）。OA處理組附睪WAT重量、附睪WAT重量占體重的百分比、脂肪細(xì)胞的體積和脂肪細(xì)胞的數(shù)量都沒有變化。
　　2.MOMA-IR指數(shù)檢測(cè):果糖對(duì)照組基礎(chǔ)血漿葡萄糖濃度和胰島素的濃度升高，從而HOMA-IR指數(shù)增高。口服葡萄糖20分鐘后果糖對(duì)照組血漿葡萄糖濃度增加。但是，OGTT實(shí)驗(yàn)中血漿葡萄糖

4、濃度的AUC沒有改變。OA(25 mg/kg)可以抑制血漿胰島素基礎(chǔ)濃度的增加、抑制HOMA-IR指數(shù)的增高，同時(shí)也抑制口服葡萄糖20分鐘后血漿葡萄糖濃度。但是，它不影響OGTT實(shí)驗(yàn)中基礎(chǔ)血漿葡萄糖濃度及AUC。OA(5 mg/kg)對(duì)這些指標(biāo)影響極小
　　3.生化指標(biāo)檢測(cè):果糖對(duì)照組總膽固醇、甘油三酯和游離脂肪酸的基礎(chǔ)血漿濃度增高。與空白對(duì)照組相比，口服葡萄糖20min、60min和120min后果糖對(duì)照組的血漿游離脂肪酸濃度和

5、AUC升高;Adipo-IR指標(biāo)也增高。OA(25 mg/kg)降低糖負(fù)荷60min后血漿NEFA的濃度和AUC;同時(shí)降低脂肪組織HOMA-IR。但是，OA(25 mg/kg)對(duì)總膽固醇、甘油三酯和NEFA沒有明顯影響。OA(5 mg/kg)對(duì)這些參數(shù)沒有明顯作用。
　　4.大鼠脂肪組織胰島素抵抗相關(guān)基因及蛋白的表達(dá)情況:OA明顯上調(diào)脂肪組織胰島素受體(IR)、IRS-1、PI3K和Akt mRNA的表達(dá)。此外，OA增高總IRS-

6、1蛋白的表達(dá)、降低果糖誘導(dǎo)的pIRS-1蛋白的表達(dá);相對(duì)于空白對(duì)照組，OA逆轉(zhuǎn)pIRS-1/總IRS-1蛋白的比例。盡管OA沒有明顯改變Akt和pAkt蛋白的表達(dá)，但是pAkt/Akt蛋白的比例明顯升高。此外，果糖導(dǎo)致的pAkt/Akt蛋白/血漿胰島素濃度的降低被逆轉(zhuǎn)至與空白對(duì)照組相似的水平。然而，OA不影響IRS-2、TNF-α、PPAR-γ、 adiponectin、SREBP-1c、FAS、ACC-1、SCD-1 mRNA的表達(dá)。