抗凍劑、CB和離心極化對豬卵母細(xì)胞冷凍效率的影響.pdf

1、本試驗的主要目的是評價兩種冷凍保護劑 EDS（乙二醇、二甲基亞砜、蔗糖和 TCM199的混合液）EPS（乙二醇、1，2-丙二醇、蔗糖和 TCM199的混合液）、CB（細(xì)胞松弛素B）和離心極化處理對豬卵母細(xì)胞凍融后存活及發(fā)育能力的影響。試驗分別應(yīng)用EDS和EPS兩種冷凍保護劑、CB（對照組和5.0、7.5及10.0μg/mL三個處理組）、離心極化處理對豬卵母細(xì)胞進行玻璃化冷凍保存，應(yīng)用臺盼藍染色法和Hochest33342染色法分析凍融后

2、的豬卵母細(xì)胞存活率及隨后的成熟率。試驗結(jié)果如下：
　　1、用EPS和EDS作為冷凍保護劑，冷凍豬GV期COCs，凍融后EPS處理組的存活率（30.7％）高于EDS處理組（28.7%），但差異不顯著（P>0.05）。EPS處理組的成熟率（15.1%）也高于EDS處理組（14.6%），但差異也不顯著（P>0.05）。
　　2、用EPS作為冷凍保護劑，分別處理豬GV期COCs和裸卵，凍融后裸卵的存活率（31.1%）顯著高于 COC

3、s的存活率（29.6%），（P<0.05）。裸卵的成熟率（15.4%）高于COCs的成熟率（14.5%），但差異不顯著（P>0.05）。
　　3、用不同濃度的CB處理豬GV期裸卵，凍融后7.5μg/mL處理組的豬GV期裸卵存活率（33.1%）顯著高于對照組的存活率（30.0%），（P<0.05），但與5.0μg/mL處理組（31.7%）和10.0μg/mL處理組（32.1%）相比，差異不顯著（P>0.05）。對照組的存活率與5.0

4、μg/mL處理組和10.0μg/mL處理組相比，差異也不顯著（P>0.05）。四個處理組間的成熟率差異均不顯著（P>0.05）。
　　4、豬 GV期裸卵經(jīng)7.5μg/mL CB和離心極化雙重處理，凍融后其存活率（36.2%）高于 CB單處理組（32.8%）和對照組（30.1%），且三組間差異均顯著（P<0.05）。其成熟率（21.4%）也顯著高于CB單處理組（18.2%）和對照組(16.3%)，（P<0.05），但CB單處理組和對

5、照組相比,成熟率差異不顯著（P>0.05）。
　　5、豬GV期卵母細(xì)胞經(jīng)體外成熟培養(yǎng)44～48h獲得MП期卵母細(xì)胞。用EPS和EDS作為冷凍保護劑，冷凍豬MП期卵母細(xì)胞，EPS作為冷凍保護劑，凍融后豬卵母細(xì)胞的存活率（30.1%）高于EDS處理組（29.0%），但差異不顯著（P>0.05）。
　　6、用不同濃度CB處理豬MП期卵母細(xì)胞，凍融后7.5μg/mL處理組的豬MП期卵母細(xì)胞存活率（34.0%）顯著高于對照組（28.2

6、%）的存活率（P<0.05），但與5.0μg/mL處理組（31.3%）和10.0μg/mL處理組（32.5%）相比，差異不顯著（P>0.05）。對照組的存活率與5.0μg/mL處理組、10.0μg/mL處理組相比，差異也不顯著（P>0.05）。
　　7、豬MП期卵母細(xì)胞經(jīng)7.5μg/mLCB和離心極化雙重處理，凍融后其存活率（37.7%）高于 CB單處理組（33.0%）和對照組（28.4%），且三個處理組間差異均顯著（P<0.05