誘導(dǎo)型一氧化氮合酶抑制劑對(duì)大鼠煙霧吸入性損傷保護(hù)作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：
　　 吸入性損傷是早期燒傷患者死亡的主要原因之一，其病理生理學(xué)機(jī)制與細(xì)胞凋亡密切相關(guān)，本實(shí)驗(yàn)以大鼠為研究對(duì)象，觀察煙霧吸入性損傷后大鼠肺組織病理改變，以及肺組織一氧化氮(Nitric oxide NO)和誘導(dǎo)型一氧化氮合酶(inducible Nitric-oxide synthase iNOS)含量的時(shí)程性變化，研究誘導(dǎo)型一氧化氮合酶抑制劑氨基胍(Aminoguanidine AG)對(duì)煙霧吸入性損傷大鼠肺組織細(xì)胞凋亡和

2、凋亡相關(guān)蛋白Bax、Bcl-2表達(dá)的影響，探討iNOS抑制劑對(duì)吸入性損傷肺臟保護(hù)機(jī)制，為臨床治療吸入性損傷提供一定的理論依據(jù)。
　　 方法：
　　 第一部分：將36只健康SD大鼠隨機(jī)分為2組，正常對(duì)照組6只(簡(jiǎn)稱對(duì)照組)和吸入性損傷組30只(簡(jiǎn)稱致傷組)。致傷組分別設(shè)2 h、6 h、12 h、24 h、48 h共5個(gè)時(shí)段，每時(shí)段6只大鼠，予以吸入性損傷造模后，每組分別于傷后各時(shí)點(diǎn)活殺，觀察肺組織大體變化情況，常規(guī)病理切片

3、HE染色光學(xué)顯微鏡下肺組織病理?yè)p傷評(píng)分變化，肺組織勻漿測(cè)NO、iNOS含量變化。
　　 第二部分：將66只健康的SD大鼠隨機(jī)分為3組，空白對(duì)照組6只(簡(jiǎn)稱空白組)、吸入性損傷+AG治療組30只(簡(jiǎn)稱治療組)、吸入性損傷組30只(簡(jiǎn)稱損傷組)，治療組和損傷組每組分別設(shè)2 h、6 h、12 h、24 h、48 h共5個(gè)時(shí)段，每時(shí)段6只大鼠，予以吸入性損傷造模后，治療組立即給予腹腔注射AG100mg/kg，損傷組予等容量生理鹽水。每組

4、分別于傷后各時(shí)點(diǎn)活殺，剖胸取肺臟組織，常規(guī)病理切片，免疫組化方法觀察Bcl-2及Bax表達(dá)變化，原位缺口末端標(biāo)記法(TUNEL法)檢測(cè)肺臟細(xì)胞凋亡情況，計(jì)算各時(shí)相點(diǎn)相應(yīng)凋亡指數(shù)(apoptosis index AI)。
　　 結(jié)果：
　　 第一部分1.大體觀察：致傷組大鼠傷后氣管、支氣管內(nèi)有粘液或泡沫狀分泌物，粘膜充血腫脹，肺表血濕潤(rùn)，胸膜下有散在出血斑，肺組織充血腫脹呈暗紅色，傷后2h時(shí)變化較局限，12h時(shí)變化最明顯。

5、2.HE染色光學(xué)顯微鏡下觀察：致傷組各級(jí)支氣管壁水腫，肺間質(zhì)充血水腫，肺泡間隔增厚，腫泡萎陷甚至完全閉塞，部分肺泡可見出血，與對(duì)照組比較，致傷組肺組織損傷病理評(píng)分在2h開始升高，24h時(shí)差異具有顯著性。傷后12h到24h病理?yè)p傷發(fā)展最快。3.肺組織勻漿NO、iNOS水平：與對(duì)照組相比較，致傷組大鼠的肺組織勻漿NO含量在損傷2h后即有升高，在12h時(shí)達(dá)到峰值。致傷后2h肺組織勻漿iNOS含量既開始出現(xiàn)升高，6h至12h之間升高的速度最快，

6、至致傷后12h，iNOS含量達(dá)到峰值，12h至24h呈顯著下降趨勢(shì)。
　　 第二部分1.HE染色：與損傷組比較，治療組大鼠肺組織充血水腫有所減輕，肺泡壁較光滑，肺泡中可見少量中性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)，肺組織淤血水腫較輕。2.免疫組化Bax、Bcl-2以及Bcl-2/Bax比值變化：與空白組比較，損傷組大鼠腫組織Bax表達(dá)顯著升高，進(jìn)行性升高至24小時(shí)達(dá)到最大值，之后其表達(dá)有所下降，但仍顯著高于正常對(duì)照組，而治療組與損傷組比較，從

7、6h開始各時(shí)間點(diǎn)均可見Bax表達(dá)下降。與對(duì)照組比較，損傷組Bcl-2表達(dá)較恒定，而治療組上調(diào)Bcl-2的水平。損傷組Bcl-2/Bax比值隨時(shí)間推移一直下降，而治療組的Bcl-2/Bax比值同樣下降，但下降程度低于損傷組。3.肺臟細(xì)胞的凋亡變化：TUNEL法顯示，與空白組比較，損傷組在2h后各時(shí)間點(diǎn)均可見凋亡指數(shù)的升高。損傷后6h和24h治療組AI低于損傷組，12h和48h，兩組AI值無(wú)顯著差異。
　　 結(jié)論：
　　 大