纈沙坦抑制非對稱二甲基精氨酸誘導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞LOX-1的表達(dá).pdf

1、背景：
　　 內(nèi)皮一氧化氮合酶（endothelialnitricoxidesynthase，eNOS）抑制劑-非對稱二甲基精氨酸(asymmetricdimethylarginine，ADMA)可競爭性抑制eNOS的活性，使NO合成減少，在多種致動脈粥樣硬化的疾病中升高，被認(rèn)為是心血管疾病獨立的預(yù)測因子。凝集素樣低密度脂蛋白受體-1(lectin-likeoxidizedlow-densitylipoproteinrecpte

2、r1，LOX-1)是外源性的清道夫受體，在生理狀態(tài)的內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)量很少，但在病理狀態(tài)下，如糖尿病、高血壓、高血脂時表達(dá)明顯升高，并特異的結(jié)合、吞噬氧化低密度脂蛋白(oxidizedlow-densitylipoprotein，ox-LDL)，進(jìn)一步促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞功能紊亂、平滑肌細(xì)胞增殖及參與泡沫細(xì)胞形成等動脈粥樣硬化的病理過程。國內(nèi)外研究發(fā)現(xiàn)，ADMA可能通過增加細(xì)胞氧化應(yīng)激水平，激活NF-κB途徑上調(diào)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(humanumbi

3、licalveinendothelialcells，HUVECs)LOX-1基因的表達(dá)，進(jìn)而增加其對oxLDL的攝取，促進(jìn)動脈粥樣硬化的發(fā)生、發(fā)展。
　　 動物實驗表明，灌注ADMA可致血管緊張素轉(zhuǎn)換酶(angiotensinconvertingenzyme，ACE)基因表達(dá)上調(diào)，活性氧(reactiveoxygenspecies，ROS)產(chǎn)生增加，誘導(dǎo)冠狀微動脈斑塊的形成;而血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制劑(angiotensincon

4、vertingenzymeinhibitor,ACEI)和血管緊張素受體拮抗劑(angiotensinreceptorblocker,ARB)可阻斷ADMA對ACE基因表達(dá)的上調(diào)作用，減少冠狀微動脈斑塊的面積。另有研究發(fā)現(xiàn)，ADMA可通過血管緊張素Ⅱ(angiotensinⅡ，ATⅡ)途徑，刺激煙酰胺腺嘌呤核苷酸還原型輔酶Ⅱ(nicotinamideadeninenucleotidecoenzymes，NADPH)氧化酶p22phox亞

5、基的表達(dá)，促進(jìn)ROS生成，誘導(dǎo)氧化應(yīng)激，而氧化應(yīng)激是動脈粥樣硬化的核心環(huán)節(jié)，以上結(jié)果提示ADMA的部分作用是通過ATⅡ進(jìn)行的。纈沙坦是臨床上常用的一種血管緊張素受體拮抗劑，廣泛用于高血壓及糖尿病腎病的治療。大量研究表明，其具有獨立于降壓作用外的血管內(nèi)皮保護(hù)作用和抗氧化應(yīng)激作用。另有研究發(fā)現(xiàn)纈沙坦可逆轉(zhuǎn)ATⅡ所致的LOX-1表達(dá)的上調(diào)。那么纈沙坦是否可阻斷ADMA對LOX-1表達(dá)的影響及是否是通過抗氧化應(yīng)激途徑發(fā)揮作用呢？本研究通過觀察纈

6、沙坦對ADMA誘導(dǎo)的HUVECsLOX-1mRNA轉(zhuǎn)錄和蛋白表達(dá)的影響，探討其可能的機(jī)制。
　　 目的:
　　 研究ADMA對HUVECsLOX-1mRNA轉(zhuǎn)錄和蛋白表達(dá)及氧化應(yīng)激的影響，并探討纈沙坦是否可拮抗ADMA的上述作用及可能的機(jī)制。
　　 方法:
　　 體外培養(yǎng)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞，隨機(jī)分為以下幾組:①正常對照組（人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)24小時）;②15umol/LADMA組（加入15umol/L的A

7、DMA干預(yù)細(xì)胞24小時）;③15umol/LADMA+纈沙坦預(yù)處理組（分別給予10-7mol/L、10-6mol/L及10-5mol/L纈沙坦預(yù)作用1小時后再加入15umol/LADMA，細(xì)胞繼續(xù)培養(yǎng)24小時）;④正常+纈沙坦組（10-5mol/L纈沙坦干預(yù)細(xì)胞24小時）。以2’，7’-二氯雙氫熒光素二乙酸鹽(DCFH-DA)為熒光探針標(biāo)記細(xì)胞，運(yùn)用流式細(xì)胞儀測定細(xì)胞內(nèi)活性氧(reactiveoxygenspeciesROS)的含量;逆

8、轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)法測定NADPH氧化酶p22phox亞基及LOX-1mRNA的轉(zhuǎn)錄;細(xì)胞酶聯(lián)免疫法(ELISA)檢測細(xì)胞LOX-1蛋白的表達(dá)。采用SPSS17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析，多組間比較采用單因素方差分析(one-wayANOVA)，兩兩比較采用t檢驗。以α=0.05為顯著性檢驗水準(zhǔn)，p＜0.05為有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　 結(jié)果:
　　 1.與對照組相比，ADMA組ROS水平明顯升高(P＜0.05)，

9、p22phoxmRNA轉(zhuǎn)錄顯著、LOX-1mRNA轉(zhuǎn)錄和LOX-1蛋白的表達(dá)明顯上調(diào)(p＜0.05)。
　　 2.與ADMA組相比，不同濃度纈沙坦組呈劑量依賴的降低細(xì)胞ROS水平(p＜0.05)，下調(diào)p22phox、LOX-1mRNA轉(zhuǎn)錄和LOX-1蛋白的表達(dá)(p＜0.05);而正常+纈沙坦組與對照組相比對上述指標(biāo)的影響差異無統(tǒng)計學(xué)意義(p＞0.05)
　　 結(jié)論:
　　 1.ADMA可能通過上調(diào)NADPH氧化酶