P2Y2受體、HuD蛋白在中高位肛門直腸畸形患兒直腸末端的表達(dá)及意義.pdf

1、目的：觀察HuD蛋白和P2Y2受體在中高位ARM患兒直腸末端以及正常結(jié)腸的表達(dá)情況，探討其對ARM患兒腸神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育的影響。
　　方法：收集我院2014年7月至2016年1月手術(shù)治療中高位ARM患兒直腸末端標(biāo)本15例（畸形組），其中腹腔鏡輔助一期肛門成形7例，年齡為2天-5月，男孩5例，女孩2例，分期肛門成形8例，男孩6例，女孩2例，其中降結(jié)腸造瘺7例，橫結(jié)腸造瘺1例，造瘺年齡為2-5天，二期手術(shù)時(shí)間為造瘺術(shù)后2-6月（其中后矢狀

2、入路肛門成形術(shù)3例,經(jīng)腹會(huì)陰肛門成形術(shù)5例），肛門成形時(shí)同時(shí)閉瘺，并取直腸末端標(biāo)本。正常結(jié)腸腸管標(biāo)本10例（正常對照組），其中腸套疊腸壞死（回結(jié)型）二期閉瘺術(shù)中取橫結(jié)腸4例，高位無肛患兒二期閉瘺術(shù)取近端造瘺的降結(jié)腸5例，絞窄性腸梗阻造瘺術(shù)閉瘺時(shí)取降結(jié)腸1例。運(yùn)用蘇木素/伊紅（HE）染色計(jì)數(shù)ARM直腸末端和正常腸管黏膜下及肌間神經(jīng)叢數(shù)量，免疫組織化學(xué)（IHC）、免疫熒光、western bloting等實(shí)驗(yàn)方法檢測HuD蛋白及P2Y2受體

3、的表達(dá)情況。并對15例ARM患兒術(shù)后隨訪，隨訪時(shí)間為4月-1年，平均隨訪時(shí)間5月，并采用Kelly評分評估肛門功能。
　　結(jié)果：1、HE染色：對照組腸管黏膜下及肌間神經(jīng)叢分布密集，數(shù)量多，節(jié)細(xì)胞數(shù)量多且發(fā)育正常，畸形組神經(jīng)叢數(shù)量稀疏濃縮成團(tuán)塊狀且神經(jīng)纖維細(xì)小，中高位ARM畸形組腸管較正常腸管神經(jīng)叢分布明顯減少，對照組神經(jīng)叢與畸形組神經(jīng)叢比較（7.30±1.26比1.20±0.73，兩組比較P<0.01）；
　　2、免疫組化結(jié)

4、果：P2Y2受體和HuD蛋白主要表達(dá)在腸肌間神經(jīng)叢和黏膜下神經(jīng)叢，陽性顯色為淡黃色至棕褐色，主要表達(dá)在胞漿，HuD蛋白在細(xì)胞核中也明顯表達(dá)。P2Y2受體和HuD蛋白在ARM直腸末端的表達(dá)明顯低于在正常腸管中的表達(dá)，其積分光密度（IOD值）分別為（18.83±3.65比8.49±2.68；43.48±7.11比3.70±1.21，兩組比較P＜0.01）；
　　3、Western bloting結(jié)果：畸形組腸管組織中HuD蛋白和P2Y

5、2受體蛋白表達(dá)量均低于正常組腸管，蛋白表達(dá)量別為(1.13±0.32比0.49±0.08；0.92±0.18比0.36±0.09，兩組比較P<0.05）；
　　4、免疫熒光化學(xué)結(jié)果：經(jīng)免疫熒光化學(xué)染色后可見正常腸管 P2Y2受體和HuD蛋白在腸肌間神經(jīng)叢和黏膜下神經(jīng)叢表現(xiàn)明亮的綠色熒光，神經(jīng)叢形態(tài)規(guī)整?；谓M神經(jīng)叢染色暗淡或無染色，形態(tài)各異，其IOD值分別為(78.13±7.86比26.56±5.32；96.56±17.38比22

6、.32±4.36，兩組比較P＜0.01）；
　　5、肛門功能隨訪結(jié)果：優(yōu)8例，良5例，差2例，優(yōu)良率為87.7％，其中肛門表現(xiàn)功能差的兩例P2Y2受體、HuD蛋白表達(dá)均低。
　　結(jié)論：
　?、?、HuD蛋白和P2Y2受體在正常結(jié)腸均有表達(dá)，主要表達(dá)在腸肌間神經(jīng)叢和黏膜下神經(jīng)叢，表達(dá)在神經(jīng)節(jié)細(xì)胞胞漿，同時(shí)HuD蛋白在神經(jīng)節(jié)細(xì)胞胞核中也明顯表達(dá)；
　?、凇RM患兒直腸末端HuD蛋白和P2Y2受體的表達(dá)均低于正常腸管；