少孢節(jié)叢孢菌（Arthrobotrys oligospora）捕食線蟲生化機制研究.pdf

1、內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學博士學位論文少孢節(jié)叢孢菌（Arthrobotrys oligospora）捕食線蟲生化機制研究姓名：王瑞申請學位級別：博士專業(yè)：預(yù)防獸醫(yī)學指導教師：楊曉野20080401普通營養(yǎng)菌絲；此外，普通營養(yǎng)菌絲總糖的含量為3 0 ．6 9 ％，高于含捕食器菌絲( 菌環(huán)和菌網(wǎng)) 2 4 ．7 7 ％的總糖含量。這表明捕食器菌絲的化學組成與普通營養(yǎng)菌絲是不一樣的，普通營養(yǎng)菌絲在變成捕食器時，蛋白質(zhì)、總糖及氨基酸等生化組分的含量均發(fā)生了

2、改變?！? 5 ) 優(yōu)化了少孢節(jié)叢孢菌捕食器表面聚合物提取的方法，研究了某些化學試劑、酶和蛋白酶抑制劑對真菌生長和捕食作用的影響，初步了解了存在于捕食器表面并參與捕食過程的物質(zhì)種類及其作用，證實了表面聚合物在黏附線蟲時具有重要作用，而且這些物質(zhì)主要為蛋白質(zhì)或含蛋白質(zhì)的化合物；同時還首次在含捕食器菌絲提取到的表面聚合物中，檢測到了蛋白酶、酸性磷酸酶和堿性磷酸酶的活性，且其活性顯著高于普通營養(yǎng)菌絲，間接證實了上述酶類物質(zhì)可能在捕食過程中起關(guān)

3、鍵作用。( 6 ) 通過研究不同誘導劑物質(zhì)和不同營養(yǎng)組成的液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)的少孢節(jié)叢孢菌發(fā)酵液后，發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)基的組成成份和相關(guān)誘導劑能夠顯著影響少孢節(jié)叢孢菌的代謝過程；而且秀麗新桿線蟲刺激產(chǎn)生的培養(yǎng)基濾液和氨基酸刺激產(chǎn)生的培養(yǎng)濾液內(nèi)所含成分不同：蛋白酶活性越高的濾液中，磷酸酶活性越低。并且從秀麗新桿線蟲作刺激物的液體培養(yǎng)基L M Z 培養(yǎng)液中純化到一種絲氨酸蛋白酶，分子量約為3 8 K D a 左右，最適p H 值范圍和最適溫度分別為p

4、H 6 “ - 8 ．5 和5 0 “ C 。這種絲氨酸蛋白酶的純化為闡明捕食性真菌對線蟲的捕食機理和捕食作用提供了重要資料。( 7 ) 擴增并分析了少孢節(jié)叢孢菌內(nèi)蒙古株( 彳．o l i g o s p o r aC H I M ) 胞外絲氨酸蛋白酶編碼基因的序列，所得序列全長為1 ．1 0 8 b p ，在片段中含有B s t X I 、D r a I I 、E c o R I 、S a c I 、S a l I 和X b a I

5、6 種限制性內(nèi)切酶酶切位點；少孢節(jié)叢孢菌C H I M 株絲氨酸蛋白酶基因與同種國外分離株和云南株的同源性分別為8 0 ．3 ％和8 4 ．1 ％：根據(jù)核苷酸推導的氨基酸序列同G e n B a n k 中發(fā)表的相應(yīng)氨基酸序列的同源性為1 0 0 ％。在線B l a s t n 分析， 證實我們擴增所得的片斷是少孢節(jié)叢孢菌絲氨酸蛋白酶編碼基因的部分序列。又一次證實捕食線蟲性真菌一少孢節(jié)叢孢菌存在不同國家、地區(qū)株的差異。關(guān)鍵詞： 捕食線蟲