膽汁淤積時肝組織線粒體功能改變及mtDNA損傷的臨床分析.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、線粒體是提供和存儲能量的重要場所,是細胞生命活動的動力站。線粒體DNA(mitochondriAlDNA,mtDNA)是核外唯一具有遺傳效應的物質,具有自我復制功能并控制著一定的遺傳性狀。線粒體損傷可引起一系列的細胞功能障礙,線粒體的功能改變及基因組的突變缺失與疾病進程有著密切的關系。梗阻性黃疸(obstructivejaundice,OJ)是臨床上常見的疾病,多由結石和腫瘤引起,常常需要采用外科治療。
   膽汁淤積時,氧自由

2、基通過脂質過氧化作用于線粒體蛋白、膜脂及mtDNA 而出現ATP酶活性降低,脂質過氧化產物蓄積,mtDNA 堿基序列改變(缺失及突變),拷貝數減少,最終引起能量代謝障礙而促進肝細胞死亡。故而線粒體作為膽汁淤積時肝細胞內最先受損害的細胞器,以及影響線粒體功能的最基本因素-mtDNA 由于缺乏有效的保護和修復能力等因素而易遭損害,線粒體功能便成了決定肝細胞功能的重要因素。所以我們通過對mtDNA 缺失損傷的初步臨床分析及線粒體的功能改變的研

3、究,為進一步揭示mtDNA 缺失致肝功能改變提供新的思路,這不僅有助于我們更加深刻的理解和完善膽汁淤積的損傷機制,而且為重度梗阻性膽汁淤積的早期治療和預后評估開辟新的途徑。
   目的:(1)通過對mtDNA 缺失及突變的臨床分析,并結合前期自然基金的研究結論,初步判定mtDNA在梗阻性黃疸患者肝組織中的損傷情況,為探討mtDNA 損傷致膽汁淤積性肝損害提供新的思路。(2)通過對膽道梗阻不同時間點肝線粒體功能學指標的檢測,以探討

4、線粒體功能損害與基因缺失的相關情況。
   方法:(1)嚴格按照入組條件隨機選取好對照組和病例組,利用17對相互錯配重疊的引物進行PCR 擴增,并結合基因測序對梗阻性黃疸患者肝細胞mtDNA的缺失及突變情況進行初步定位。(2)制備梗阻性黃疸大鼠模型,設立對照組、SHAM組和BDL組,利用Elisa 檢測線粒體ATP 酶及脂質過氧化產物MDA的改變情況。
   結果:(1)通過多對引物擴增并結合測序結果分析,梗阻性黃疸患者

5、部分肝細胞mtDNA分別出現堿基位置8429~9591處約1.1kb的缺失,16024~60處約0.6kb的缺失,1889~3031處約1.1kb的多片段缺失以及D-loop 區(qū)部分堿基的高突變率;同時部分細胞mtDNA在8470~8482bp和13447~13459bp 之間出現了4977bp 片段的共同缺失。(2)隨著梗阻時間延長,較之對照組而言,BDL組MDA在肝臟線粒體內逐漸潴留(p<0.05),于14d時出現不可逆改變(p<0

6、.05);而ATP 酶活性逐漸降低(p<0.05),于14d時降至最低(p<0.05),但在梗阻早期(1-3d),ATP 酶活性下降不明顯(p>0.05)。
   結論:膽道梗阻時,由于膽汁排出受阻,組織缺血缺氧,過氧化作用增強而生成的大量氧自由基。后者通過脂質過氧化作用對線粒體膜脂、膜蛋白及mtDNA造成損傷,表現為:MDA在線粒體內蓄積,Na+-K+-ATP酶活性降低,線粒體功能受到損害;除此之外,肝細胞線粒體基因組由于缺乏

7、有效的組蛋白保護以及缺乏對氧自由基的有效清除能力而易受損,部分細胞mtDNA出現了多片段缺失及部分堿基的突變。這與前一國家自然基金的動物研究結果基本相仿。因而我們認為:膽汁淤積時,MDA的潴留對mtDNA的損傷起到積極的作用,是造成肝細胞線粒體功能以及肝功能受損的重要因素。因而積極有效地清除MDA及保護mtDNA的功能性和完整性也將成為今后研究的重點,這也為研究梗阻性黃疸肝功能的損傷機制及保護手段提供了新的思路,為臨床上保護及改善梗阻性

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