功血飲治療功能性子宮出血的藥效及機理研究.pdf

1、本論文課題來源于南京市醫(yī)學(xué)科技發(fā)展重點項目(ZKX07023),旨在中醫(yī)理論的指導(dǎo)下研究功血飲治療功能性子宮出血的藥效及機理,為本項目后期藥品的開發(fā)提供科學(xué)數(shù)據(jù)和研究支撐。本論文主要內(nèi)容包括以下幾個部分:
　　 一.功血飲治療功能性子宮出血的止血作用及機制研究
　　 通過選取動情期雌性大鼠與雄性大鼠合籠,篩選出懷孕大鼠。于第7天分別灌胃米非司酮溶液和米索前列醇溶液,造成早孕大鼠不完全流產(chǎn)模型,隨機分為模型組,宮血寧組,功

2、血飲三個劑量組。另取10只早孕大鼠為空白對照組。給藥后測定子宮出血量,末次給藥后,選取處于動情間期的大鼠進行眼眶取血,分離血清,大鼠處死后,迅速摘取子宮、卵巢、腎上腺、脾臟及胸腺并稱重,計算其臟器系數(shù),稱重后的子宮,置10％福爾馬林中固定,石蠟包埋,切片,HE染色,做組織形態(tài)學(xué)檢查。采用放免法測定血清雌二醇(E2),孕酮(P)水平;采用RT-PCR方法獲得大鼠子宮ERmRNA、PRmRNA的逆轉(zhuǎn)錄表達產(chǎn)物cDNA,用瓊脂糖凝膠電泳方法檢

3、測,計算機圖像分析系統(tǒng)進行統(tǒng)計分析。結(jié)果顯示(δ)模型組大鼠子宮出血量明顯增多,與空白對照組比較有顯著性差異(P＜0.01);功血飲5.5、11、22g/kg劑量大鼠與模型組比較,子宮出血量均顯著減少(P＜0.01)。(δ)模型組大鼠子宮臟器系數(shù)下降,具有顯著性差異(P＜0.01)。功血飲5.5、11、22g/kg劑量組與模型組比較,子宮和卵巢系數(shù)均有增加。子宮組織形態(tài)學(xué)檢查也表明功血飲可增加腺體的數(shù)目。(δ)功血飲22g/kg能明顯升

4、高E2水平(P＜0.05)。功血飲5.5、11、22g/kg劑量組均能降低ERmRNA、PRmRNA.的表達(P＜0.05,P＜0.01)。
　　 通過采用小鼠斷尾法及玻片和毛細(xì)玻管法觀察功血飲對小鼠凝血、出血時間的影響。結(jié)果顯示功血飲能明顯縮短小鼠出血和凝血時間(P＜0.01)。
　　 通過采用離體子宮實驗法觀察功血飲對子宮平滑肌收縮的影響。實驗前3d,每天皮下注射己烯雌酚。實驗時頸椎脫臼處死大鼠,剖腹取出子宮,置于與

5、壓力換能器相連的麥?zhǔn)显〔壑?持續(xù)供氧,記錄正常收縮曲線10min,然后加入不同濃度的功血飲溶液,分別記錄加入藥物后的子宮的活動曲線。此外用縮宮素造模后,觀察功血飲對子宮收縮的影響。結(jié)果顯示功血飲中劑量、大劑量組可明顯增強子宮平滑肌的收縮頻率(p＜0.01),且呈劑量依賴性關(guān)系,但對子宮收縮的強度影響不大。功血飲各劑量組能增強子宮平滑肌的活動力(p＜0.05,p＜0.01),并隨著濃度的增大而增大;功血飲中、大劑量組可以使縮宮素誘導(dǎo)的子宮

6、異常收縮加強的子宮收縮頻率下降(p＜0.01)。
　　 實驗研究表明功血飲能有效減少不完全流產(chǎn)模型大鼠的子宮出血量,增加大鼠性器官的重量,在一定程度上促進子宮和卵巢發(fā)育,調(diào)節(jié)性激素和子宮內(nèi)膜ER和PR的作用。此外,功血飲能縮短小鼠出血凝血時間,增強離體大鼠子宮平滑肌的收縮頻率,收縮強度和活動力,對縮宮素所致的子宮收縮加強有一定的抑制作用,表現(xiàn)為收縮頻率的降低,收縮幅度的減小,活動力下降。
　　 二.功血飲含藥血清對卵巢顆

7、粒細(xì)胞的影響
　　 通過體外培養(yǎng)大鼠卵巢顆粒細(xì)胞,培養(yǎng)24h后,加入大鼠含藥血清,采用MTT法測定OD值和放免法測定上清液中E2和P的含量。結(jié)果顯示功血飲含藥血清各劑量組細(xì)胞生長明顯提高(p＜0.01),表現(xiàn)為促進卵巢顆粒細(xì)胞的增殖,促進GC分泌E2和P。
　　 通過體外培養(yǎng)大鼠卵巢顆粒細(xì)胞,培養(yǎng)24h后,加入的CdCl2終濃度分別為OuM、10uM、20uM、40uM、60uM、80uM,37℃、5％CO2培養(yǎng)48h后

8、,采用MTT比色法于酶聯(lián)免疫測定儀490nm波長處測定OD值。結(jié)果顯示隨著CdCl2濃度的增加,OD值降低,提示其呈現(xiàn)劑量依賴性關(guān)系。
　　 通過體外培養(yǎng)大鼠卵巢顆粒細(xì)胞,采用CdCl2造成損傷模型,采用MTT法觀察功血飲含藥血清對CdCl2損傷的卵巢顆粒細(xì)胞的保護作用,放免法觀察上清液中E2和P的變化。結(jié)果顯示功血飲含藥血清能明顯促進卵巢顆粒細(xì)胞的增殖,促進GC分泌E2和P(p＜0.01),保護CdCl2對細(xì)胞的損傷。

9、　　 以上系列實驗研究表明功血飲含藥血清能促進正常卵巢顆粒細(xì)胞的增殖和分泌,并能抑制氯化鎘對大鼠卵巢顆粒細(xì)胞的損傷,具有保護細(xì)胞的作用。
　　 三.功血飲鎮(zhèn)痛抗炎的藥效學(xué)研究
　　 通過縮宮素和冰醋酸致小鼠實驗性疼痛模型觀察功血飲的鎮(zhèn)痛作用,實驗結(jié)果顯示功血飲11、22、44g/kg劑量組可明顯減少縮宮素所致小鼠的扭體反應(yīng)次數(shù)和醋酸所致小鼠的扭體反應(yīng)次數(shù)。
　　 通過二甲苯致小鼠耳廓腫脹和醋酸致毛細(xì)血管通透性增