益氣化瘀化痰法對肺纖維化大鼠肺組織結(jié)構(gòu)及TNF-a、NF-κB的影響.pdf

1、目的:
　　觀察益氣化瘀化痰法(YHH)對肺纖維化大鼠肺組織結(jié)構(gòu)及腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor-α，TNF-α)、核因子-kB(nuclearfactor-kB，NF-kB)表達水平的影響，探討益氣化瘀化痰法改善肺纖維化作用及其作用機理。
　　方法:
　　1.造模及分組：同批次健康清潔級SD大鼠100只。采用10％水合氯醛腹腔注射麻醉大鼠。麻醉后，隨機選取90只大鼠氣管內(nèi)一次性灌注博萊霉

2、素建立肺纖維化大鼠模型；其余10只大鼠氣管內(nèi)一次性灌注等體積的生理鹽水，作為正常對照組(Z組)。造模后第28天，隨機選取2只大鼠處死，取肺組織行HE及Masson染色，參照Szapiel等的方法光鏡下觀察，確認肺纖維化模型復(fù)制成功。大鼠造模成功后隨機分成6組：模型組(M組)、氫化可的松組(QK組)、益氣組(YQ組)、化瘀組(HY組)、化痰組(HT組)、益氣化瘀化痰組(YHH組)。
　　2.采用HE、Masson染色，運用光鏡技術(shù)觀

3、察肺組織病理形態(tài)學(xué)變化。
　　3.運用透射電鏡技術(shù)觀察肺組織超微結(jié)構(gòu)變化。
　　4.運用免疫組化法檢測肺組織中TNF-α、NF-kB的表達水平情況。
　　5.統(tǒng)計方法：所有數(shù)據(jù)采用均數(shù)土標準差(x±s)表示。應(yīng)用SPSS17.0統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)分析。組間比較及兩兩比較采用單因素方差分析及LSD-t法檢驗。以P<0.05為差異有顯著性。
　　結(jié)果:
　　1.肺組織病理形態(tài)學(xué)觀察：
　　(1)HE染色顯示

4、：Z組肺內(nèi)結(jié)構(gòu)清晰，無充血水腫、炎癥及纖維化表現(xiàn)；M組肺組織結(jié)構(gòu)破壞嚴重，肺泡腔萎陷，肺內(nèi)存在大片實變區(qū)，纖維增生明顯；QK組、YQ組、HY組、HT組和YHH組的肺組織纖維化程度均較M組情況有所減輕，肺泡壁結(jié)構(gòu)基本正常，肺泡間隔纖維增生灶減少，肺泡內(nèi)未見明顯的滲出物淤積。
　　(2)Masson染色顯示：Z組肺內(nèi)結(jié)構(gòu)正常，肺泡間隔存在少量藍染膠原纖維；M組肺組織纖維化明顯，肺泡組織結(jié)構(gòu)破壞嚴重，肺泡間隔大量藍染膠原纖維呈片狀積聚；

5、YQ組、HY組、HT組和YHH組膠原沉積量明顯減少，纖維化程度明顯減輕；QK組膠原沉積量較少，但減輕程度較各中藥治療組弱。
　　2.電鏡結(jié)果
　　Z組大鼠肺泡Ⅰ、Ⅱ型上皮細胞連接緊密，細胞間少量基質(zhì)和膠原纖維存在。M組Ⅰ型上皮細胞變性，部分脫落、崩解，Ⅱ型上皮細胞增生，膠原纖維在間質(zhì)大量堆積。QK組Ⅰ型上皮細胞基本正常，Ⅱ型上皮細胞增多不明顯，間質(zhì)內(nèi)有少量膠原纖維存在。YQ組、HY組、HT組和YHH組Ⅰ型上皮細胞結(jié)構(gòu)基本完整

6、，Ⅱ型肺泡上皮細胞增多不明顯，間質(zhì)成纖維細胞量減少，間質(zhì)內(nèi)仍有少量的膠原纖維堆積，以YHH組改善最明顯。
　　3.益氣化瘀化痰法對TNF-α、NF-kB的影響
　　(1)TNF-α的表達：TNF-α在細胞胞漿中有陽性表達。Z組肺組織中TNF-α未見棕黃色染色顆粒，無陽性表達；M組TNF-α陽性表達強烈，表達廣泛，陽性細胞數(shù)目明顯增多，細胞胞漿染色偶見深褐色，陽性表達明顯高于Z組；QK組、YQ組、HY組、HT組和YHH組肺組織

7、細胞包漿中，棕黃色染色顆粒散在分布，以YHH組陽性細胞數(shù)目最少，但仍較Z組明顯增多。
　　(2)NF-kB的表達：NF-kB在細胞胞漿和胞核中均有陽性表達，以胞核表達為主。Z組中未見棕黃色染色細胞顆粒存在，無陽性表達；M組、QK組和各中藥治療組陽性細胞數(shù)目均較Z組明顯增多；M組陽性細胞數(shù)目最多，表達最強烈。
　　(3)光密度值顯示：與Z組比較，M組TNF-α、NF-kB表達均有所升高(P<0.01)；與M組比較，QK組、YQ