Cs菌絲粉對大鼠膿毒性急性腎損傷中klotho蛋白表達(dá)的影響.pdf

1、目的：通過檢測膿毒血癥急性腎損傷大鼠腎組織中 klotho蛋白的表達(dá)情況，并應(yīng)用Cs菌絲粉干預(yù)，來研究klotho蛋白在膿毒血癥急性腎損傷發(fā)病機(jī)制中的作用。
　　方法：選取健康雄性 SD大鼠72只（等級：SPF），體重250g左右，4周齡，隨機(jī)分為空白對照組（n=16）、CLP組（模型組）（n=28）、Cs菌絲粉干預(yù)組（n=28）。對照組普通進(jìn)食水，開腹后找到盲腸只作輕輕擠壓，不結(jié)扎穿刺，模型組普通進(jìn)食水，行 CLP術(shù)；干預(yù)組為

2、Cs菌絲粉干預(yù)組，于術(shù)前1周開始冬蟲夏草[Cs]組5g/(kg·d）灌胃，行CLP術(shù)。對照組術(shù)前15 min、術(shù)后3 h皮下注射生理鹽水20mg/kg，后2組分別于術(shù)前15 min、術(shù)后3 h皮下注射鹽酸左氧氟沙星20 mg/kg，術(shù)后為補(bǔ)充手術(shù)過程中丟失體液量給以生理鹽水5 ml/kg皮下注射。每組分別于術(shù)后6h、12h、24h通過腹主動脈采血（對照組每組每個時間點2只，其余每組每個時間點6只），然后分離血清（用3000 r/min離

3、心機(jī)離心15min），檢測血清肌酐及尿素氮，ELISA法測定腎組織勻漿中的klotho蛋白、MDA、CAT水平；取靜脈血做細(xì)菌培養(yǎng)；取出腎臟，將右腎放入4％多聚甲醛中固定24至48小時，之后用石蠟包被，通過HE染色觀察腎組織病理損傷，免疫組化法檢測 klotho蛋白表達(dá)及定位。每組于術(shù)后12小時分別隨機(jī)取一只老鼠左腎上級約1cm3放入戊二醛中固定，用于電鏡檢測行電鏡檢測。每組余10只大鼠觀察生物學(xué)行為變化及4天、7天存活率。
　　

4、結(jié)果：1、模型組大鼠精神欠佳，運動遲緩；進(jìn)食水較少；毛發(fā)散亂直立。剖腹可見腹水為淡血性，且量較多，明顯惡臭味；腸管充血水腫，腸管組織粘連較重，部分盲腸末端發(fā)黑。對照組無上述變化。干預(yù)組大鼠術(shù)后一般狀況介于 A、模型組之間。2、血肌酐：干預(yù)組各時間點血肌酐濃度顯著低于模型組（P<0.05），于12h后開始下降，24h接近對照組水平（P>0.05），但仍稍高于對照組；與對照組比較，模型組血肌酐濃度則顯著升高（P<0.05）。3、血尿素氮：與

5、對照組比較，模型組各時間點尿素氮水平均顯著升高（P<0.05），干預(yù)組各時間點血尿素氮水平較模型組明顯降低（P<0.05），但6h時與對照組差異不大（P>0.05），但仍明顯高于對照組。4、免疫組化腎組織 klotho蛋白表達(dá)情況：與對照組、模型組相比，干預(yù)組腎組織 klotho蛋白表達(dá)明顯上升（P<0.05）。5、腎組織勻漿 klotho蛋白水平：模型組血 klotho蛋白水平明顯低于對照組（P<0.05），干預(yù)組則明顯高于模型組（P

6、<0.05）。6、腎組織勻漿MDA水平：模型組明顯升高（P<0.05），干預(yù)組較模型組明顯下降（P<0.05）。7、腎組織勻漿 CAT含量：干預(yù)組較模型組明顯升高（P<0.05），模型組較對照組明顯下降（P<0.05）。8、血細(xì)菌培養(yǎng)，對照組無細(xì)菌生長，模型組、干預(yù)組均可見細(xì)菌生長，可檢出大腸桿菌、變形桿菌、假單胞菌屬和少量格蘭陽性球菌。9、對照組、模型組、干預(yù)組4天存活率分別為100%、30%、40%；干預(yù)組與模型組比較差異雖無統(tǒng)計學(xué)