薏苡仁油注射液抑制LncRNA--PVT1表達(dá)影響胃癌細(xì)胞耐藥性的研究.pdf

1、本研究首先在胃癌耐藥組織和細(xì)胞中，利用qPCR檢測(cè)了PVT1的表達(dá);然后通過調(diào)控PVT1的表達(dá)，觀察其對(duì)胃癌耐藥細(xì)胞中耐藥相關(guān)蛋白的影響;隨后利用薏苡仁油注射液處理胃癌耐藥細(xì)胞株，觀察PVT1的表達(dá)變化;最后通過調(diào)控胃癌耐藥細(xì)胞中PVT1的表達(dá)并利用薏苡仁油注射液處理后，觀察胃癌耐藥相關(guān)蛋白的表達(dá)變化。最終闡明PVT1在胃癌耐藥性中所扮演的角色及其發(fā)揮功能的分子機(jī)制。本研究為深入闡明胃癌耐藥性的分子機(jī)制提供了依據(jù)，同時(shí)為胃癌耐藥性的治療

2、提供了理論基礎(chǔ)。
　　研究?jī)?nèi)容分為4部分:
　　1.LncRNA-PVT1對(duì)胃癌細(xì)胞耐藥性的影響
　　目的:分析胃癌耐藥性患者腫瘤組織和胃癌耐藥細(xì)胞株中PVT1的表達(dá)情況，并進(jìn)一步在體外觀察PVT1過表達(dá)或表達(dá)抑制對(duì)胃癌細(xì)胞耐藥性的影響。
　　方法:首先分離順鉑耐藥性和順鉑敏感性胃癌患者腫瘤組織，利用qPCR檢測(cè)兩組樣本中PVT1的表達(dá)量;而后利用qPCR測(cè)定胃癌耐藥細(xì)胞株BGC823/DDP和SGC7901/D

3、DP中PVT1的表達(dá)量。BGC823/DDP和SGC7901/DDP細(xì)胞株分別轉(zhuǎn)染干擾序列si-PVT1后，利用qPCR測(cè)定PVT1的表達(dá)量;隨后利用1μg/ml的順鉑分別處理細(xì)胞株24 h、36h和48h后，CCK-8檢測(cè)細(xì)胞的存活率。BGC823和SGC7901分別轉(zhuǎn)染過表達(dá)載體LV-PVTl-GFP后，利用qPCR測(cè)定PVT1的表達(dá)量;隨后再利用1μg/ml的順鉑處理細(xì)胞株48 h后，流式細(xì)胞術(shù)結(jié)合AnnexinⅤ-PI法測(cè)定細(xì)胞

4、的凋亡率
　　結(jié)果:胃癌耐藥性患者腫瘤組織和胃癌耐藥細(xì)胞株（BGC823/DDP和SGC7901/DDP）中PVT1的表達(dá)量顯著上調(diào);PVT1干擾序列顯著降低了胃癌耐藥細(xì)胞株中PVT1的表達(dá);胃癌耐藥細(xì)胞轉(zhuǎn)染si-PVT1并用順鉑處理后，顯著降低了胃癌耐藥細(xì)胞的存活率，并增加了其凋亡率;胃癌細(xì)胞株BGC823和SGC7901轉(zhuǎn)染LV-PVT1-GFP并利用順鉑處理后，顯著增加了胃癌細(xì)胞株中PVT1的表達(dá)，并抑制了細(xì)胞的凋亡率。

5、r>　　結(jié)論:胃癌耐藥性患者腫瘤組織及胃癌耐藥細(xì)胞株中，PVT1的表達(dá)上調(diào);過表達(dá)PVT1，增加了胃癌細(xì)胞株對(duì)順鉑的耐藥性;抑制PVT1的表達(dá)，增加了胃癌細(xì)胞株對(duì)順鉑的敏感性。
　　2.PVT1增加胃癌細(xì)胞耐藥性的分子機(jī)制研究
　　目的:體外過表達(dá)PVT1，檢測(cè)順鉑處理后的胃癌細(xì)胞多藥耐藥性相關(guān)分子MDR-1、MRP1、mTOR和HIF-1α的表達(dá)變化，旨在探討PVT1促進(jìn)胃癌細(xì)胞耐藥性的分子機(jī)制。
　　方法:構(gòu)建PV

6、T1過表達(dá)載體LV-PVT1-GFP轉(zhuǎn)染胃癌細(xì)胞BGC823和SGC7901，并用順鉑處理48 h后，利用qPCR檢測(cè)MDR-1、MRP1、mTOR和HIF-1α的mRNA的表達(dá)量;利用western blotting檢測(cè)MDR-1和MRP1的蛋白表達(dá)量。
　　結(jié)果:PVT1過表達(dá)顯著增加了經(jīng)順鉑處理的胃癌細(xì)胞株中MDR-1和MRP1的表達(dá)，而mTOR和HIF-1α的表達(dá)量不受PVT1的調(diào)控。
　　結(jié)論:PVT1調(diào)控胃癌細(xì)胞

7、對(duì)順鉑的耐藥性極有可能是通過調(diào)控MDR1及MRP1的表達(dá)而實(shí)現(xiàn)的，而mTOR和HIFα的表達(dá)卻不受PVT1的調(diào)控而參與胃癌耐藥性機(jī)制。
　　3.薏苡仁油注射液對(duì)胃癌細(xì)胞耐藥性的影響
　　目的:采用不同濃度薏苡仁油注射液處理胃癌耐藥株細(xì)胞BGC823/DDP和SGC7901/DDP，旨在探討薏苡仁油注射液對(duì)胃癌細(xì)胞耐藥性的影響。
　　方法:選取胃癌耐藥株細(xì)胞BGC823/DDP和SGC7901/DDP，用濃度梯度不同的薏

8、苡仁油注射液(1、2.5、5μl/ml)分別處理24、36、48 h，利用CCK-8檢測(cè)細(xì)胞活力;薏苡仁油注射液處理48h后，流式細(xì)胞術(shù)結(jié)合AnnexinⅤ-PI法檢測(cè)細(xì)胞凋亡情況;利用qPCR檢測(cè)MDR1和MRP1的mRNA的表達(dá)量;利用western blotting測(cè)定MDR1和MRP1蛋白表達(dá)量。
　　結(jié)果:利用不同濃度薏苡仁油注射液處理胃癌耐藥株細(xì)胞BGC823/DDP和SGC7901/DDP一段時(shí)間后，結(jié)果顯示:同一時(shí)

9、間點(diǎn)，隨著薏苡仁油注射液濃度的增加，細(xì)胞活力顯著降低，而其凋亡率顯著升高;同一濃度的薏苡仁油注射液，隨著處理時(shí)間的增加，細(xì)胞活力顯著下降，而其凋亡率顯著升高。隨后我們檢測(cè)了不同濃度薏苡仁油注射液處理胃癌耐藥株細(xì)胞BGC823/DDP和SGC7901/DDP24 h和48 h后，MDR1和MRP1的表達(dá)量。結(jié)果顯示:無論處理時(shí)間是24 h還是48 h，MDR1和MRP1的表達(dá)都隨著處理濃度的增加而顯著降低，呈劑量依賴性。
　　結(jié)論:

10、薏苡仁油注射液處理胃癌耐藥細(xì)胞株促進(jìn)了細(xì)胞的凋亡而抑制了其活性，同時(shí)降低了MDR1和MRP1的表達(dá)。即表明:薏苡仁油注射液處理顯著降低了胃癌細(xì)胞對(duì)順鉑的耐藥性。
　　4.薏苡仁油注射液抑制胃癌細(xì)胞耐藥性的分子機(jī)制研究
　　目的:體外過表達(dá)PVT1，檢測(cè)薏苡仁油注射液處理后胃癌耐藥細(xì)胞株多藥耐藥性相關(guān)分子MDR1、MRP1的表達(dá)，旨在探討薏苡仁油注射液抑制胃癌細(xì)胞耐藥性的分子機(jī)制。
　　方法:不同濃度薏苡仁油注射液處理胃

11、癌耐藥細(xì)胞株BGC823/DDP和SGC7901/DDP24 h后，qPCR檢測(cè)PVT1的表達(dá)。PVT1高表達(dá)慢病毒轉(zhuǎn)染胃癌耐藥細(xì)胞BGC823/DDP和SGC7901/DDP后，再利用2.5μl/ml濃度薏苡仁油注射液處理。流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡率;qPCR檢測(cè)MDR1和MRP1的mRNA表達(dá)量;western blotting檢測(cè)MDR1和MRP1的蛋白表達(dá)量。
　　結(jié)果:不同濃度薏苡仁油注射液處理胃癌耐藥細(xì)胞BGC823/D

12、DP和SGC7901/DDP后，PVT1的表達(dá)隨著薏苡仁油注射液濃度的增加而顯著降低;PVT1高表達(dá)慢病毒轉(zhuǎn)染胃癌耐藥細(xì)胞BGC823/DDP和SGC7901/DDP，并用薏苡仁油注射液處理后，顯著抑制了細(xì)胞的凋亡率，同時(shí)顯著上調(diào)了MDR1和MRP1的表達(dá)。
　　結(jié)論:薏苡仁油注射液通過抑制PVT1降低多藥耐藥性相關(guān)分子MDR1和MRP1的表達(dá)進(jìn)而抑制了胃癌細(xì)胞耐藥性。
　　綜上所述，本文深入探討了PVT1對(duì)胃癌耐藥性的影響