高血糖對(duì)實(shí)驗(yàn)性角膜及脈絡(luò)膜新生血管影響的研究.pdf

1、背景與目的：
　　 血管新生(angiogenesis)廣泛參與機(jī)體的生長(zhǎng)發(fā)育、炎癥反應(yīng)、創(chuàng)傷愈合、腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移等多個(gè)生理、病理過(guò)程，如何有效地阻止病理性新生血管的進(jìn)展一直是生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域研究的熱點(diǎn)之一。糖尿病(diabetes mellitus，DM)是一組以血糖代謝異常為特征的代謝性疾病，隨著生活條件的改善，DM患病率呈逐年上升之勢(shì)，長(zhǎng)期高血糖狀態(tài)引起的多個(gè)系統(tǒng)并發(fā)癥不僅嚴(yán)重影響了患者的生活質(zhì)量，亦增加了社會(huì)的醫(yī)療負(fù)

2、擔(dān)。DM可致眼部視網(wǎng)膜血管的過(guò)度增生，而在肢端缺血及缺血性心血管疾病中則抑制側(cè)支循環(huán)的建立。DM與新生血管的關(guān)系究竟怎樣?在大血管(macrovascular)和微血管(microvascular)系統(tǒng)中是否起到相同的作用?這些看似矛盾的結(jié)果確切機(jī)制是什么?對(duì)上述問(wèn)題的探討有助于各種DM并發(fā)癥的防治，亦有助于更好地調(diào)控新生血管的發(fā)生發(fā)展，從而為阻止疾病的發(fā)展、促進(jìn)創(chuàng)傷的愈合提供新的思路。
　　 本研究旨在通過(guò)鏈脲佐菌素(stre

3、ptozotocin，STZ)誘導(dǎo)小鼠的DM模型，進(jìn)一步利用堿燒傷誘導(dǎo)角膜新生血管(corneal neovascularization，CNV)形成以及激光誘導(dǎo)的脈絡(luò)膜新生血管(choroidal neovascularization，ChNV)模型，研究高血糖狀態(tài)對(duì)眼前、后段局部新生血管發(fā)生過(guò)程的影響，比較CNV與ChNV的異同，初步探討高血糖狀態(tài)與角膜及脈絡(luò)膜新生血管的關(guān)系。
　　 材料與方法：
　　 DM小鼠模型

4、的誘導(dǎo)50只BABL/c小鼠及12只C57BL/6小鼠隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組(DM組)及對(duì)照組(Con組)，DM組采用STZ多次小劑量注射方法(MultipleLow-Dose Streptozotocin，MLDS)：1％STZ溶液(檸檬酸鹽緩沖液配置)腹腔注射，注射劑量為50mg/kg，連續(xù)注射5 d。Con組采用等量的檸檬酸鹽溶液進(jìn)行腹腔注射。
　　 CNV模型的研究50只BALB/c小鼠，其中26只經(jīng)腹腔注射STZ后血糖升高，為

5、DM組；另24只注射緩沖液的為Con組。以堿燒傷誘導(dǎo)CNV為模型，在堿燒傷后14 d對(duì)兩組角膜的新生血管進(jìn)行拍照記錄并分析，并將堿燒傷后第14 d小鼠眼球摘除，冰凍切片后行免疫組化CD31染色檢測(cè)角膜新生血管；同時(shí)各取6只DM組及Con組小鼠堿燒傷后第2 d、4 d及7 d的角膜，提取RNA后進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶聯(lián)反應(yīng)(RT-PCT)，分析并比較血管新生相關(guān)細(xì)胞因子的表達(dá)。
　　 ChNV模型的研究12只C57BL/6小鼠(DM組

6、及Con組各6只)進(jìn)行眼底激光光凝，第14 d后行眼底血管熒光造影(FFA)及脈絡(luò)膜鋪片熒光染色，比較兩組之間ChNV面積的差異，分析高血糖狀態(tài)對(duì)ChNV的影響。
　　 結(jié)果：
　　 經(jīng)MLDS腹腔注射后小鼠隨機(jī)血糖均達(dá)到成DM模型標(biāo)準(zhǔn)(≥11.1mmol/L)，DM組小鼠較Con組小鼠體重減輕，飲水及尿量明顯增加。
　　 重復(fù)性實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：堿燒傷誘導(dǎo)后DM組小鼠CNV面積與Con組小鼠相比無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0

7、.05)。
　　 經(jīng)激光誘導(dǎo)后形成的ChNV面積在DM組小鼠中有所減少，統(tǒng)計(jì)分析差異有顯著性(P<0.05)。
　　 結(jié)論：
　　 經(jīng)MLDS法誘導(dǎo)BALB/c及C57BL/6小鼠成DM具有成模率高、致死率低及高血糖水平維持時(shí)間長(zhǎng)等特點(diǎn)，可為研究DM相關(guān)的疾病提供較理想的動(dòng)物模型。
　　 在MLDS誘導(dǎo)的BALB/c DM小鼠中，早期的高血糖狀態(tài)對(duì)CNV的發(fā)生及發(fā)展影響不明顯。
　　 在MLDS誘