PEDF、VEGF和Ang-2在實(shí)驗(yàn)性脈絡(luò)膜新生血管的表達(dá).pdf

1、脈絡(luò)膜新生血管(choroidal neovascularization，CNV)是由多種病因所致的脈絡(luò)膜新生血管芽穿越Bmch膜，在視網(wǎng)-．膜色素上皮下和/或視網(wǎng)膜神經(jīng)上皮下增殖形成的纖維血管組織，常伴有黃斑部視網(wǎng)膜下的漿液性滲出和出血，可導(dǎo)致多種眼底疾病(年齡相關(guān)性黃斑變性、擬眼組織胞漿綜合癥、眼底血管樣條紋合并黃斑變性、病理性近視黃斑病變、中心性滲出性視網(wǎng)膜病變等)，是視力喪失的主要原因。以CNV為主要病理特征的年齡相關(guān)性黃斑變性

2、目前已成為國(guó)內(nèi)外老年人群中首要的致盲性眼病。 CNV的確切發(fā)病機(jī)制尚未闡明，缺乏理想的防治手段。目前抑制或消退CNV的途徑有激光光凝、光動(dòng)力療法(PDT)、經(jīng)瞳孔溫?zé)岑煼?TTT)、手術(shù)剝除及放射治療，但治療效果不盡如人意，或復(fù)發(fā)率高，或不可避免損傷正常組織結(jié)構(gòu)，造成視功能進(jìn)一步惡化。因此，探討CNV發(fā)病機(jī)理，在此基礎(chǔ)上尋求一安全、穩(wěn)定、高效的治療策略勢(shì)在必行。 血管生成是一個(gè)復(fù)雜的過(guò)程。首先血管舒張、血管通透性增加、周

3、圍基質(zhì)降解，接著內(nèi)皮細(xì)胞(endothelial cells，EC)活化、移行、增生、出芽生長(zhǎng)并形成管腔，最后新生血管成熟、重塑構(gòu)成血管網(wǎng)。目前已發(fā)現(xiàn)多種細(xì)胞因子參與新生血管生成的調(diào)控，CNV發(fā)生早期的重要步驟包括：Bmch膜的變化、基質(zhì)金屬蛋白酶(matrix metallo proteinases，MMPs)的活化、血管生長(zhǎng)因子與抑制因子表達(dá)的變化。血管生長(zhǎng)因子和抑制因子之間平衡的破壞是血管生成的關(guān)鍵因素之一。血管生長(zhǎng)因子包括血管內(nèi)

4、皮生長(zhǎng)因子(VEGF)、成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(bFGF)、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子(TGF-B)、血管生成素(Ang)等。血管生長(zhǎng)抑制因子包括色素上皮衍生因子(PEDF)、血管抑素(AS)、內(nèi)皮抑素(ES)等。新生血管的形成不僅與誘導(dǎo)新生血管因子濃度增高有關(guān)，而且與抗血管新生因子水平降低有關(guān)。盡管很多細(xì)胞因子在體外有調(diào)節(jié)血管生成的作用，但在體內(nèi)特異作用于血管內(nèi)皮細(xì)胞的血管生長(zhǎng)因子只有血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子和血管生成素；在所有的抗新生血管因子中作用最強(qiáng)的是P

5、EDF。因此我們通過(guò)檢測(cè)在實(shí)驗(yàn)性CNV組織中PEDF、VEGF和Ang-2蛋白質(zhì)含量的變化，得出結(jié)論：三者表達(dá)失衡可能在CNV的形成過(guò)程中起到調(diào)控作用。 目的：觀察PEDF、VEGF和．Ang-2在實(shí)驗(yàn)性CNV中的表達(dá)，探討它們?cè)贑NV中的作用機(jī)制。 方法：對(duì)照組：2只BN大鼠(4只眼)，空白對(duì)照。實(shí)驗(yàn)組：24只BN大鼠(48只眼)，應(yīng)用氪激光光凝視網(wǎng)膜制備CNV模型，隨機(jī)分為6組，分別在光凝后1，3，7，14，21，2

6、8天行熒光素眼底血管造影(FFA)后摘除眼球。應(yīng)用免疫組化方法檢測(cè)各組大鼠光凝區(qū)和正常視網(wǎng)膜中PEDF、VEGF和Ang-2蛋白的表達(dá)，用圖像分析軟件(真彩色病理圖像分析系統(tǒng)V4.0)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行陽(yáng)性染色密度半定量分析，再應(yīng)用SPSS10．0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。 結(jié)果：1．PEDF蛋白質(zhì)在正常BN大鼠視網(wǎng)膜視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層、內(nèi)核層、色素上皮(RPE)層表達(dá)。光凝后在激光損傷區(qū)PEDF表達(dá)于視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層、內(nèi)核層、色素上皮層

7、、外核層和脈絡(luò)膜損傷區(qū)。光凝后3天激光損傷區(qū)PEDF表達(dá)陽(yáng)性染色密度最高，與其他各組比較差異顯著(P<0.05)，其后實(shí)驗(yàn)各組PEDF陽(yáng)性染色密度逐漸下降，但各組之間比較無(wú)顯著差異。2.VEGF蛋白質(zhì)在正常BN大鼠視網(wǎng)膜視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層、內(nèi)核層、色素上皮層、視網(wǎng)膜和脈絡(luò)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞有輕度陽(yáng)性表達(dá)。光凝7天后在激光損傷區(qū)VEGF表達(dá)于視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層、內(nèi)核層、外核層缺損區(qū)、視網(wǎng)膜和脈絡(luò)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞及CNV增殖區(qū)，光凝后14天CNV

8、增殖區(qū)陽(yáng)性染色密度最高，與其他各組比較差異顯著(P<0.05)。其它各組陽(yáng)性染色密度變化無(wú)顯著差異。3.Ang-2在正常BN大鼠視網(wǎng)膜各層均無(wú)陽(yáng)性染色。光凝組視網(wǎng)膜中，Ang-2蛋白質(zhì)在激光損傷區(qū)的視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層、內(nèi)核層、外核層缺損區(qū)及CNV增殖區(qū)有陽(yáng)性染色，7天時(shí)陽(yáng)性染色密度最高，與其他各組比較差異顯著(P<0.05)，光凝7天后各時(shí)間點(diǎn)陽(yáng)性染色密度無(wú)顯著差異。 結(jié)論：1.PEDF表達(dá)不足可能是CNV形成和增殖一個(gè)主要原因