鞭毛內(nèi)運輸?shù)鞍譏FT25是小鼠精子發(fā)生和雄性生育所必需的.pdf

1、目的:
　　研究鞭毛內(nèi)運輸?shù)鞍?5(Ift25)對小鼠精子鞭毛的形成的影響以及對雄性生育的作用。
　　方法:
　　1.Ift25flox/flox的雌性小鼠與Stra8-iCre雄鼠雜交得到stra8-iCre;Ift25flox/-;
　　2.RT-PCR檢測IFT25基因在小鼠不同組織中mRNA的表達;
　　3.Western Blot檢測不同蛋白在小鼠不同組織及敲除小鼠與對照小鼠中的蛋白表達情況;

2、r>　　4.HE染色檢測Ift25基因敲除小鼠附睪及睪丸中精子發(fā)生不同階段的形態(tài)變化;
　　5.生精細胞切片制備:生精細胞切片染色觀察精子鞭毛附屬結(jié)構(gòu);
　　6.SEM觀察精子的超微結(jié)構(gòu)變化及TEM觀察附睪及睪丸的超微結(jié)構(gòu)變化;
　　7.酵母雙雜交實驗及免疫共沉淀實驗是檢測蛋白之間的相互作用;
　　8.統(tǒng)計分析精子計數(shù)、精子運動速率、活精子比率等統(tǒng)計指標。
　　結(jié)果:
　　在雄性小鼠中，Ift25基因

3、在睪丸組織中高度表達，并且在精子發(fā)生的第三階段（精子鞭毛形成階段）表達量呈上升趨勢。為了探索Ift25在精子鞭毛形成中的作用，本研究在雄性生殖細胞中特異性敲除這個基因。結(jié)果發(fā)現(xiàn)與野生型小鼠相比，所有Ift25基因敲除小鼠都能夠活到成年，并沒有任何生長異常。然而，生育能力測試表明所有的基因敲除小鼠表現(xiàn)出完全不育。統(tǒng)計分析表明在ft25基因基因敲除小鼠中精子數(shù)量明顯下降，且完全喪失運動能力。HE染色發(fā)現(xiàn)Ift25基因敲除小鼠曲精小管管腔中生

4、精細胞數(shù)量明顯下降，排列紊亂，成熟階段的精子很少。光鏡下觀察到多種異常的精子形態(tài)，如圓形的頭部，短而彎曲或末端腫脹的尾巴，分枝的鞭毛及異常增厚的鞭毛。透射電鏡下觀察到的精子異常表型與光鏡下的形態(tài)變化一致。掃描電鏡顯示Ift25基因敲除的小鼠絕大多數(shù)發(fā)育成熟的精子失去“9+2”結(jié)構(gòu)及附屬結(jié)構(gòu)，包括外層致密纖維，纖維鞘和線粒體鞘也被破壞。在Ift25基因敲除的小鼠附睪精子中，纖維鞘的主要組成成分AKAP4不表達;而外層致密纖維的組成成分之一

5、ODF2仍然存在，但其定位的附屬結(jié)構(gòu)包括外層致密纖維和纖維鞘也被破壞。在Ift25基因敲除小鼠中，Ift27，是Ift25的一個相互作用蛋白，也完全消失。而且我們檢測的其他Ift蛋白中，Ift20和Ift81在Ift25基因基因敲除小鼠中表達量明顯下降，而ft74和Ift140的表達量卻沒有明顯變化。
　　結(jié)論:
　　鞭毛內(nèi)運輸?shù)鞍?5（Ift25）是小鼠精子鞭毛形成和雄性生育所必需的蛋白，在調(diào)節(jié)精子發(fā)生過程中起著重要的作用