衰老對(duì)人和小鼠睪丸精子發(fā)生影響及其機(jī)制的研究.pdf

1、　　目的
　　探討衰老對(duì)人睪丸組織學(xué)結(jié)構(gòu)與精子發(fā)生的影響,以及生精細(xì)胞增殖與凋亡的變化,分析衰老過(guò)程精子發(fā)生衰減的機(jī)制；借助老年小鼠模型探討衰老對(duì)小鼠睪丸精子發(fā)生、附睪精子功能和受精的影響,為男性生殖衰老研究提供參考資料。
　　方法
　　1.老年人睪丸組織25例,根據(jù)年齡分為兩組,A組54-69歲(n=12)和B組70-88歲(n=13),以青年人睪丸組織(C組,n=8)作為對(duì)照組,應(yīng)用光鏡和透射電鏡觀察老年人睪丸組織

2、結(jié)構(gòu),光鏡下隨機(jī)選擇20個(gè)曲細(xì)精管橫截面,分別計(jì)數(shù)支持細(xì)胞和各級(jí)生精細(xì)胞的數(shù)目,分析精子發(fā)生狀況。應(yīng)用TdT介導(dǎo)的原位缺口末端標(biāo)記技術(shù)(TUNEL)檢測(cè)睪丸生精細(xì)胞凋亡情況,應(yīng)用免疫組化方法測(cè)定生精細(xì)胞中增殖細(xì)胞核抗原(PCNA)的表達(dá)。
　　2.昆明系雄性小鼠,根據(jù)年齡分組：老年組為18月齡,對(duì)照組為6月齡,每組15只,分別取睪丸、附睪頭精子和附睪尾精子,觀察睪丸組織的增齡性變化,光鏡下隨機(jī)選擇20個(gè)曲細(xì)精管橫截面,分別計(jì)數(shù)支持

3、細(xì)胞和各級(jí)生精細(xì)胞的數(shù)目,分析精子發(fā)生狀況。檢測(cè)附睪頭和附睪尾的精子參數(shù)包括精子密度、存活率、活動(dòng)率、正常形態(tài)率和胞漿小滴率,應(yīng)用體外受精和早期胚胎培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)老年小鼠精子受精能力和胚胎發(fā)育情況。
　　結(jié)果
　　1.老年人睪丸組織學(xué)顯示部分曲細(xì)精管萎縮,生精功能低下,生精阻滯常見(jiàn),主要發(fā)生在精子細(xì)胞和初級(jí)精母細(xì)胞階段,可見(jiàn)未成熟生精細(xì)胞脫落到管腔。透射電鏡觀察到老年人曲細(xì)精管基膜增厚,支持細(xì)胞胞漿內(nèi)有明顯空泡,內(nèi)質(zhì)網(wǎng)疏松,溶

4、酶體大而不規(guī)則,精子細(xì)胞染色質(zhì)呈粗顆粒狀,胞漿內(nèi)線粒體腫脹。
　　2.老年人睪丸精子發(fā)生的定量分析顯示老年A組和B組曲細(xì)精管橫截面內(nèi)暨南大學(xué)碩士學(xué)位論文衰老對(duì)人和小鼠翠丸精子發(fā)生影響及其機(jī)制的研究支持細(xì)胞平均數(shù)目均顯著低于C組(尸<；0.01),A組和B組精原細(xì)胞與支持細(xì)胞的比值與C組相比均無(wú)顯著差異(P>；0.05),B組初級(jí)精母細(xì)胞與支持細(xì)胞的比值低于C組(尸<；0.05),A組和B組球形精子細(xì)胞和延長(zhǎng)精子細(xì)胞與支

5、持細(xì)胞的比值均低于C組(P<；0.001)。比較A組和B組各級(jí)生精細(xì)胞與支持細(xì)胞的比值,均未見(jiàn)顯著差異(羚0.05)。
　　3.老年人B組肇丸生精細(xì)胞增殖指數(shù)(PI)顯著低于C組和A組(尸<；0.01),B組翠丸生精細(xì)胞凋亡指數(shù)顯著高于C組(P<；0.01),老年A組增殖指數(shù)與凋亡指數(shù)的比值(Pl/Al)與C組的比較沒(méi)有顯著差異(P>；0.05),B組PI/AI顯著低于C組和A組(P<；0.01)。
　　

6、4.老年小鼠肇丸組織呈現(xiàn)部分曲細(xì)精管萎縮,生精功能低下。老年組曲細(xì)精管橫截面內(nèi),支持細(xì)胞數(shù)目與對(duì)照組的比較沒(méi)有顯著差異(尸>；0.05),精原細(xì)胞和初級(jí)精母細(xì)胞與支持細(xì)胞的比值與對(duì)照組比較均無(wú)顯著差異(尸>；0.05),球形精子細(xì)胞和延長(zhǎng)精子細(xì)胞與支持細(xì)胞的比值均低于對(duì)照組(P<；0.01)。
　　5.老年小鼠附翠頭的精子密度、活動(dòng)率和胞漿小滴率均顯著低于對(duì)照組 (P<；0.01),精子存活率和正常形態(tài)率與對(duì)照組

7、相比未見(jiàn)顯著差異(P>；0.05)。老年小鼠附翠尾精子密度、活動(dòng)率和正常形態(tài)率均低于對(duì)照組(p<；0.05),體外受精率顯著低于對(duì)照組(尸<；0.001),且受精后胚胎發(fā)育率降低(P<；0.01)。
　　結(jié)論
　　1.老年人肇丸組織顯示出增齡性結(jié)構(gòu)改變,表現(xiàn)為曲細(xì)精管內(nèi)支持細(xì)胞數(shù)目減少,精原細(xì)胞未減少,初級(jí)精母細(xì)胞及其后階段的精子細(xì)胞明顯減少,表明老年人翠丸精子發(fā)生是衰減的。
　　2.老年人辜丸生精細(xì)胞