油菜菌核病菌中的新病毒及其特性研究.pdf

1、真菌病毒是寄生真菌的病毒，其中一些病毒可以引起植物病原真菌致病力的衰退，具有控制作物病害的潛力。引起菌核病的核盤菌在自然界中廣泛存在，可感染450多種或亞種植物。在此研究之前，實驗室已經(jīng)從核盤菌中發(fā)現(xiàn)了一些對核盤菌具有顯著影響的真菌病毒，它們顯著地降低了致病性。從中國湖北省、江西省和安徽省等地方分離獲得了2000株核盤菌菌株，獲得了173株生長異常菌以期從中篩選新的真菌病毒。分別從173個菌株中提取獲得了總RNA并等量混勻，之后對總RN

2、A樣品進行了RNA_Seq分析。經(jīng)過拼接，獲得了247個具有顯著病毒序列特性的contig，這些contig預示測定的173個菌株中存在多種多樣的真菌病毒。對contig所推定編碼的蛋白序列在NCBI數(shù)據(jù)中進行比對，發(fā)現(xiàn)247個contig可能代表了48種真菌病毒，其中35種ssRNA(+)病毒，7種ssRNA(-)病毒，5種dsRNA病毒和1種ssDNA病毒，其中線粒體病毒是主要類型。
　　對四個Contig(contig3，c

3、ontig50，contig71和contig1178)所代表的新RNA病毒進行了確認，其中contig3和contig50代表的為負鏈RNA病毒，contig3所代表的病毒命名為Sclerotinia sclerotiorum bunya-like virus1(SsB1V1)，隸屬于Bunyaviridae科;contig50所代表的病毒命名為Sclerotinia sclerotiorum negative-stranded RN

4、A virus9(SsNsRV9)，與一些分類地位待定的病毒具有較近的親緣關(guān)系。contig71和contig1178代表的為新的(+)ssRNA病毒，均為Tymovirales目的病毒，分別命名為Sclerotinia sclerotiorum mycotymovirus1(SsMTV1)和Sclerotiniasclerotiorum deltaflexivirus2(SsDFV2)。
　　對SsDFV2進行了詳細的研究，發(fā)現(xiàn)

5、該病毒與Botrytis porri RNA virus1(BpRV1)共同侵染低毒菌株228。228菌株在PDA上生長緩慢，產(chǎn)生菌核少，而且產(chǎn)生時間延遲，幾乎不能誘導油菜差生病斑。建立在Contig序列的基礎(chǔ)上采用5'-和3'-RACE等對SsDFV2的基因組進行了全長測定。發(fā)現(xiàn)SsDFV2的基因組全長為6711nt，含有Poly(A)尾。SsDFV2的基因組只含有一個推定的大開放閱讀框架，編碼一個假定的病毒RNA復制酶，包括典型的甲

6、基轉(zhuǎn)移酶、RNA解旋酶和RdRp等三個功能域。SsDFV2與核盤菌上的另外一種病毒
　　Sclerotinia sclerotiorum deltaflexivirus1(SsDFV1)具有較高的同源性，復制酶中氨基酸相同性達到446/1185(38％)，相似性達到625/1185(52％)。它們在系統(tǒng)上聚為一支，同屬于擬建立的Deltaflexiviridae科。SsDFV1的基因組編碼4推定的蛋白，而SsDFV2的基因只編碼R

7、NA復制酶，推定SsDFV2在核盤菌中可能丟失了其它的基因。
　　營養(yǎng)體不親和性反應嚴重限制了真菌病毒在寄主真菌間的擴散，嚴重制約了真菌病毒防治病害的效果。我們研究發(fā)現(xiàn)SsDFV2具有強的侵染能力，將菌株228與其營養(yǎng)體不親和的菌株Ep-1PNA367和菌株1980進行對峙培養(yǎng)，發(fā)現(xiàn)病毒SsDFV2可以擴散到這兩個菌株的菌落之中，而與SsDFV2共同感染菌株228的BpRV1卻沒有這種擴散能力。進一步將感染SsDFV2的Ep-1P