腸道菌群紊亂對雌鼠受孕胚胎發(fā)育的影響研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的:
  探討腸道菌群影響雌鼠受孕發(fā)育的機(jī)制,為利用腸道菌群調(diào)整和改善不孕癥打下基礎(chǔ)。
  方法:
  1.實(shí)驗(yàn)分組:選擇清潔級4周齡Swiss雌性小鼠(ICR)264只。隨機(jī)分為2組:腸道菌群紊亂組與正常對照組。
  2.實(shí)驗(yàn)批次:分四批次(春夏秋冬),每批次66只雌性Swiss小鼠,其中腸道菌群紊亂組與正常對照組各33只。
  3.實(shí)驗(yàn)周期:每批次實(shí)驗(yàn)小鼠周期為46天,腸道菌群紊亂組小鼠自第1天起進(jìn)行

2、腸道菌群紊亂至28天止,之后進(jìn)行受孕,雌鼠與雄鼠進(jìn)行合籠,合籠比例為雌鼠∶雄鼠=3∶1。連續(xù)觀察雌性小鼠孕栓3天,出現(xiàn)孕栓的雌性小鼠繼續(xù)飼養(yǎng)16天處死,沒有出現(xiàn)孕栓小鼠當(dāng)即處死。
  4.菌群失衡模型的建立:菌群紊亂組雌性小鼠用400mg/ml頭孢曲松鈉灌胃,灌胃劑量為0.2ml/次/只,一日2次,間隔6-8小時(shí),連續(xù)四周,同時(shí)設(shè)置正常對照組,用生理鹽水灌服,劑量方法同上。
  5.孕栓檢查:合籠交配后于第二天早上檢測孕栓。

3、觀察雌性小鼠陰道白色凝固殘留物。有殘留物的即為孕栓及受孕。
  6.樣本收集:收集雌性小鼠卵巢、血清、胚胎小鼠腸道、腸內(nèi)容物和糞便進(jìn)行指標(biāo)檢測。
  7.應(yīng)用ELISA方法對各組小鼠血清雌酮、雌二醇、睪酮、雄烯二酮水平進(jìn)行檢測。
  8.應(yīng)用PCR-DGGE方法對各組小鼠腸道菌群進(jìn)行分析,對差異明顯條帶進(jìn)行切膠回收、純化、測序,測序結(jié)果經(jīng)GenBank比對后確定細(xì)菌種類;
  9.收集雌鼠卵巢,進(jìn)行HE染色切片,

4、觀察卵巢形態(tài)變化。
  結(jié)果:
  1.菌群紊亂組受孕鼠數(shù)為79只,受孕率為81.4%;正常對照組受孕鼠數(shù)為69只,受孕率為71.1%,兩組差別顯著(P<0.05)。與正常對照組相比,菌群紊亂組受孕率高于正常組10.3%。
  2.季節(jié)的變化和菌群紊亂對受孕率均有影響,與正常對照組相比,冬季菌群紊亂組變化最為明顯,受孕率為87.0%;春季和夏季菌群紊亂組變化次之,受孕率分別為81.80%和76.0%;秋季菌群紊亂組變化

5、不明顯,受孕率為62.9%。
  3.菌群紊亂組的死胎數(shù)為32只,死胎率為4.44%,與正常對照組相比,兩組間有顯著差別(P<0.05),菌群紊亂組的死胎率高于正常對照組。
  4.在雌鼠的胎鼠中發(fā)現(xiàn)胎鼠腸道具有腸道菌群的16srna的序列。
  5.與對照組相比,菌群紊亂組孕鼠雌酮、雌二醇含量降低(p<0.05);雄烯二酮含量升高(p<0.05),睪酮含量沒有顯著變化(p>0.05)
  6.與正常對照組雌鼠卵

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