狂犬病毒強(qiáng)弱毒株差異性激活星狀膠質(zhì)細(xì)胞天然免疫通路的機(jī)制研究.pdf

1、狂犬病是一種古老的疾病，一直對全世界的公共衛(wèi)生造成極大的威脅，并導(dǎo)致每年約59000死于狂犬病。狂犬病的致病原為狂犬病毒（Rabies virus，RABV），其逃逸宿主中樞神經(jīng)系統(tǒng)（Central Nervous System，CNS）天然免疫的機(jī)制目前仍未完全清楚。我們之前的研究發(fā)現(xiàn)，在小鼠和犬感染模型中，狂犬病毒實(shí)驗(yàn)室固定毒株（弱毒株）能夠激活天然免疫反應(yīng)，而野毒株則不能激活。星狀膠質(zhì)細(xì)胞是組成血腦屏障（Blood-brain B

2、arrier,BBB）的重要元件，其被證實(shí)可在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中通過激活天然免疫和調(diào)控BBB通透性來限制或清除病原微生物的感染，對中樞神經(jīng)系統(tǒng)起到重要的保護(hù)作用。
　　本文研究中，我們重點(diǎn)探索了星狀膠質(zhì)細(xì)胞在狂犬病毒感染時發(fā)揮的各方面功能。首先，為了驗(yàn)證本研究中所使用的狂犬病毒（DRV-AH08，簡稱DRV）具有野毒株的特性，我們建立了小鼠感染模型，發(fā)現(xiàn)DRV感染的小鼠死亡時間明顯早于弱毒株B2c感染的小鼠，且DRV感染小鼠后并未表現(xiàn)

3、出炎癥反應(yīng)和外周免疫細(xì)胞入侵中樞神經(jīng)系統(tǒng)的現(xiàn)象，表明本研究中所使用的野毒株DRV具有野生型狂犬病毒的特性，符合后續(xù)實(shí)驗(yàn)需求。其次，我們分離、純化和培養(yǎng)了原代星狀膠質(zhì)細(xì)胞(Primary astrocyte)，并用DRV和B2c分別對原代星狀膠質(zhì)細(xì)胞進(jìn)行感染，我們發(fā)現(xiàn)B2c表現(xiàn)為暫時性感染，而DRV則可以持續(xù)的感染星狀膠質(zhì)細(xì)胞。我們進(jìn)一步比較了DRV和B2c感染星狀膠質(zhì)細(xì)胞后MAVS通路關(guān)鍵分子的表達(dá)水平，結(jié)果顯示B2c感染后的MAVS通

4、路激活水平顯著高于DRV，且這種激活是由于病毒復(fù)制轉(zhuǎn)錄過程中產(chǎn)生的RNA引起的。因此，我們繼續(xù)對狂犬病毒兩種不同毒株感染星狀膠質(zhì)細(xì)胞后dsRNA的產(chǎn)生水平進(jìn)行了分析，結(jié)果表明B2c感染星狀膠質(zhì)細(xì)胞后產(chǎn)生的dsRNA水平要明顯高于DRV感染組。我們進(jìn)一步利用MAVS和TLR7基因敲除小鼠進(jìn)行了體內(nèi)、體外的感染實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)B2c能夠持續(xù)感染從MAVS基因敲除小鼠中分離的星狀膠質(zhì)細(xì)胞，但依舊不能感染TLR7基因敲除小鼠中分離的星狀膠質(zhì)細(xì)胞，驗(yàn)證

5、了MAVS通路是狂犬病毒強(qiáng)弱毒株感染星狀膠質(zhì)細(xì)胞后產(chǎn)生差異的關(guān)鍵通路。此外，我們還發(fā)現(xiàn)B2c感染星狀膠質(zhì)細(xì)胞后產(chǎn)生的與MAVS通路相關(guān)的炎癥因子要明顯高于DRV，與DRV感染相比，狂犬病毒B2c感染星狀膠質(zhì)細(xì)胞后能夠顯著增加體外BBB模型對大分子物質(zhì)的通透性，且B2c感染的星狀膠質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)上清能顯著降解緊密連接蛋白ZO-1。
　　總之，本研究發(fā)現(xiàn)星狀膠質(zhì)細(xì)胞在限制狂犬病毒感染中發(fā)揮這重要作用，具體表現(xiàn)在它可以通過活化MAVS通路產(chǎn)