P38MAPK對高糖誘導(dǎo)腎小球系膜細胞MMP-9和TIMP-1表達的影響.pdf

1、目的：糖尿病腎病(DN)是糖尿病的重要的微血管并發(fā)癥之一，目前20～30％的糖尿病患者合并腎病，并最終發(fā)展為終末期腎病，腎小球基底膜增厚和細胞外基質(zhì)增加是DN的重要的病理改變，它導(dǎo)致腎小球的高濾過和微量蛋白尿的發(fā)生。腎小球系膜細胞在這些病理過程中起著關(guān)鍵性作用。DN的發(fā)病機制錯綜復(fù)雜，目前仍未完全清楚。近年來，p38絲裂原活化蛋白激酶(MAPK)信號通路在DN發(fā)病中的作用日益受到關(guān)注。研究顯示腎小球細胞外基質(zhì)的增加是其合成增加與分解受抑

2、制綜合作用的結(jié)果。早期的研究主要集中在細胞外基質(zhì)合成增加方面，而細胞外基質(zhì)降解的減少在DN發(fā)病中的重要地位最近才開始受到關(guān)注?；|(zhì)金屬蛋白酶(MMPs)及其組織抑制劑(TIMPs)是影響細胞外基質(zhì)降解的主要因素。研究顯示它們參與了一些腎臟疾病的發(fā)生，但是關(guān)于他們在DN發(fā)生發(fā)展中的作用未完全明確，并且它們與p38MAPK信號通路的關(guān)系尚不清楚。本研究通過觀察高糖刺激后大鼠腎小球系膜細胞p38MAPK、MMP-9和TIMP-1mRNA的表達

3、，以及使用p38MAPK特異性抑制劑SB203580干預(yù)后MMP-9和TIMP-1mRNA表達的變化，探討p38MAPK信號通路與MMP-9/TIMP-1在DN發(fā)生發(fā)展中的作用。
　　 方法：將培養(yǎng)的SD大鼠腎小球系膜細胞分為6組：(1)正常對照組：5.6mmol/L的葡萄糖；(2)高糖A組：10mmol/L的葡萄糖；(3)高糖B組：20mmol/L的葡萄糖；(4)高糖C組：30mmol/L的葡萄糖；(5)SB203580組：3

4、0mmol/L的葡萄糖+10μmol/L SB203580；(6)甘露醇組：5.6mmol/L的葡萄糖+24.4mmol/L的甘露醇。待細胞生長狀況良好，細胞長至80％左右密度后，無血清同步化細胞24小時，分別用以上各因素處理細胞繼續(xù)培養(yǎng)，于培養(yǎng)72小時后收集細胞，提取總mRNA，逆轉(zhuǎn)錄成cDNA，采用實時熒光定量PCR法檢測各組腎小球系膜細胞p38MAPK、MMP-9和TIMP-1mRNA的表達。
　　 結(jié)果：
　　

5、1、正常條件下系膜細胞p38MAPK、MMP-9和TIMP-1在mRNA水平上均有表達。
　　 2、高糖組和甘露醇組p38 MAPKmRNA的表達均高于正常組，但高糖組p38MAPKmRNA的表達增加更明顯，且當葡萄糖濃度由10mmol/L增加到20mmol/L及30mmol/L時，p38MAPKmRNA的表達也逐漸增加。
　　 3、高糖組和甘露醇組TIMP-1mRNA的表達較正常組明顯升高，而MMP-9mRNA表達和M

6、MP-9/TIMP-1比值與正常組相比明顯下降，高糖組的這些改變比相同滲透壓的甘露醇組更明顯，且隨著葡萄糖濃度的增加，這些變化也越來越明顯。
　　 4、與同濃度葡萄糖組相比，p38 MAPK抑制劑SB203580組系膜細胞MMP-9mRNA表達和MMP-9/TIMP-1比值增加，TIMP-1 mRNA表達下降，p38MAPK mRNA的表達沒有明顯變化。
　　 結(jié)論：
　　 1、高糖誘導(dǎo)SD大鼠腎小球系膜細胞p3

7、8 MAPK和TIMP-1mRNA的表達升高，而使系膜細胞MMP-9mRNA表達和MMP-9/TIMP-1比值下降，且高糖引起的這些變化呈濃度依賴性；
　　 2、甘露醇增加系膜細胞p38MAPK與TIMP-1mRNA的表達，減少MMP-9mRNA的表達，高糖誘導(dǎo)的系膜細胞這些指標的變化可能部分地是通過高滲透壓作用引起的；
　　 3、p38MAPK特異性抑制劑SB203580能逆轉(zhuǎn)高糖誘導(dǎo)的MMP-9和TIMP-1mRNA