高糖對(duì)myocardin和SM α-actin在大鼠腎小球系膜細(xì)胞中表達(dá)的影響.pdf

1、目的：目前，糖尿病性腎病是導(dǎo)致終末期腎病的主要原因之一。在糖尿病性腎病發(fā)病早期，伴隨腎小球高濾過(guò)率，早期超濾癥狀的出現(xiàn)將引發(fā)蛋白尿的增加，進(jìn)而發(fā)展為臨床上的腎病。而腎小球系膜細(xì)胞能調(diào)節(jié)腎小球毛細(xì)血管表面積的大小，其收縮功能的下降是導(dǎo)致糖尿病腎病中超濾現(xiàn)象的原因。因此，對(duì)該疾病早期發(fā)病機(jī)制的研究將成為預(yù)防和治療該疾病的關(guān)鍵。由于腎小球系膜細(xì)胞可以表達(dá)平滑肌特異性的收縮蛋白SMα-actin，我們?cè)趯?shí)驗(yàn)初期也證實(shí)了系膜細(xì)胞中也表達(dá)調(diào)控平滑肌

2、收縮表型的核轉(zhuǎn)錄因子myocardin。因而我們用高糖處理體外培養(yǎng)的腎小球系膜細(xì)胞，模擬糖尿病患者機(jī)體內(nèi)高糖血癥的環(huán)境，在此基礎(chǔ)上研究myocardin及其下游的靶蛋白SMα-actin在大鼠腎小球系膜細(xì)胞中表達(dá)及功能。
　　 方法：用DMEM低糖培養(yǎng)基培養(yǎng)大鼠腎小球系膜細(xì)胞系(HBYZ-1)至細(xì)胞密度達(dá)到70％后，饑餓24h，分別以D-葡萄糖(30 mM)、L-葡萄糖(30 mM)和甘露醇(30 mM)處理24小時(shí)后，提取細(xì)胞

3、總mRNA用實(shí)時(shí)定量.聚合酶鏈反應(yīng)(Real-time Polymerase chain reaction，Real-time PCR)檢測(cè)myocardin和SMα-actin的mRNA表達(dá)水平，提取細(xì)胞總蛋白用蛋白質(zhì)印跡(western blot)的方法檢測(cè)myocardin和SMα-actin的蛋白表達(dá)水平以及MAPK信號(hào)通路的相關(guān)蛋白的激活。
　　 結(jié)果：1.高糖可以升高myocardin和SMa-actin的mRNA表

4、達(dá)水平，但是降低SMα-actin的蛋白表達(dá)水平；2.甘露醇可以升高SMα-actin的mRNA表達(dá)水平降低SMα-actin的蛋白表達(dá)水平，但對(duì)myocardin的mRNA表達(dá)水平?jīng)]有作用；3.L-葡萄糖對(duì)myoeardin和SMα-actin的表達(dá)沒(méi)有明顯作用；4.高糖和甘露醇都可以在5 min時(shí)激活MAPK信號(hào)通路；5.MAPK信號(hào)通路被阻斷后，在高糖和甘露醇處理下SMα-actin的蛋白表達(dá)水平恢復(fù)。
　　 結(jié)論：