豬鏈球菌2型分離株致病性及其凍干保護(hù)劑優(yōu)化.pdf

1、豬鏈球菌(Streptococcus suis,S.suis)屬革蘭氏陽性兼性厭氧球菌,有溶血性,是重要的人獸共患病病原,呈世界性分布。該病原主要通過呼吸道及粘膜途徑感染人畜,能引起敗血癥、關(guān)節(jié)炎、心內(nèi)膜炎及腦膜炎等多種病癥,病死率高,對養(yǎng)豬生產(chǎn)、食品安全及公共衛(wèi)生構(gòu)成巨大的威脅。豬鏈球菌有35種血清型,其中2型豬鏈球菌(Streptococcus suis type2,SS2)致病力最強,是臨床病例中經(jīng)常分離到的血清型。目前,已發(fā)現(xiàn)S

2、S2具有多種毒力因子,但其功能和致病機理至今尚未完全明確。本研究比較了SS2分離株的體內(nèi)外致病力差異,篩選并優(yōu)化了SS2的凍干保護(hù)劑組合。
　　 比較了5個SS2分離株對Hep-2和Vero細(xì)胞的細(xì)胞毒性和黏附侵襲力的差異,研究了溶血素對Hep-2細(xì)胞毒性作用以及不同初始菌量SS2(104至107CFU)和不同孵育時間(30min、60min、120min)條件下的黏附特征。結(jié)果表明,5個SS2分離株高濃度接種時對Hep-2的細(xì)

3、胞毒性無顯著差異,但分離株HN137對Vero細(xì)胞的毒性要顯著低于其他4株;在低濃度接種條件下,分離株ZJXS033對兩種細(xì)胞的毒性高于其它菌株。此外,本試驗證明了溶血素是引起Hep-2細(xì)胞溶解的主要毒力因子。隨著孵育時間的增加,黏附率提高:孵育時間一定時,隨著加入細(xì)菌濃度的升高,黏附的細(xì)菌數(shù)隨之增加,但在高接種劑量的條件下黏附率偏低。本試驗所用SS2分離株對Hep-2細(xì)胞的黏附率均較低,分離株HZ0604最高為0.32％,分離株ZJX

4、S033最低為0.08％。
　　 以野生斑馬魚作為模式動物,對6株mrp+epf+sly+豬鏈球菌2型(SS2)分離株進(jìn)行致病性比較。斑馬魚經(jīng)腹腔接種不同稀釋度的SS2分離株,連續(xù)觀察5天,Kaplan-Meier生存曲線分析并統(tǒng)計半數(shù)致死量。結(jié)果顯示,6個分離株對斑馬魚的LD50均在105-10+CFU之間,分離株間的毒力差異不顯著。從攻毒后死亡的魚腹腔和腦可分離到SS2,并觀察到魚腹腔出血及肝、腸、腦部炎性病變。
　　

5、 選取SS2分離株HN137比較了4種凍干保護(hù)劑——葡萄糖、蔗糖、丙三醇和脫脂乳粉的單因素保護(hù)效果,其保護(hù)率分別為6.17％,10.29％,13.55％和15.89％。優(yōu)選出丙三醇和脫脂乳粉進(jìn)行響應(yīng)面分析試驗,優(yōu)化的凍干保護(hù)劑配方為:脫脂乳粉8％、甘油5％,預(yù)測即時存活率達(dá)45％左右。加速儲存試驗對分離株HN137同批凍干樣品在不同溫度(25、30、35、40、45℃)條件下存放,分離株HN137同批凍干樣品在不同溫度(25、30、3